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2017-08-12 发布于重庆
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家蝇cDNA文库的构建.pdf

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动　物　学　研　究　2001 , Apr. 22 ( 2) : 89～92 CN 53 - 1040/ Q　ISSN 0254 - 5853 Zoological Research 简报家蝇 cDNA 文库的构建 ① 王来元　王金星　赵小凡　王来城　康翠杰 ( 山东大学生命科学学院生物系济南　250100) 关键词 : 家蝇 ; cDNA 文库 ; 重组率 ; 文库滴度 ( ) 中图分类号 : Q969453 8 , Q3431 　文献标识码 : A 　文章编号 : 0254 - 5853 2001 02 - 0159 - 04 　　自 Boman 小组 ( Steiner , 1981 ) 从惜古比天蚕大小。 ( Hyalophora cecropia) 中分离、纯化出第一种抗菌肽天蚕素 12 4 　cDNA 片段的重组　用 T DNA 连接酶 , 将 Eco R Ⅰ/ 4 以来, 人们已在昆虫和其他无脊椎动物中发现了 170 多种 Not ⅠAdaptor 连接在 cDNA 分子的两端 , 用 T 多核苷酸激 4 ( ) 抗菌肽 Lowenberger et al , 1999 。目前 , 人们不仅搞清酶将其磷酸化后 , 再与具有相同粘性末端的脱磷酸载体楚了多数抗菌肽的氨基酸序列、结构和功能特点 , 而且还 λ gt11 左右臂连接。对一些抗菌肽的基因进行了克隆 ( 陈留存和王金星 , 因为难以确定可与λ噬菌体臂相连接的 cDNA 的摩尔 1999) 。我们以家蝇为材料 , 分离、纯化出了抗菌肽 , 在此浓度 , 所以必须进行一系列预连接和包装反应 ( Sambrook 基础上 , 构建了经过诱导的家蝇 cDNA 文库 , 以克隆其基 et al , 1992) , 以探索 cDNA 与 λ噬菌体臂的最佳连接条因。件。我们按照试剂盒的说明书做了以下 3 个预连接反应 , 并将每个连接反应产物分别包装 , 测定每个包装产物的滴 1 　材料和方法度 , 根据滴度大小确定哪一个是最佳连接反应。根据这个 11 　实验材料