鸡传染性法氏囊病的RT_PCR诊断方法的研究.pdfVIP

第 29 卷 增刊 Ⅰ　 　　　　　华 　中 　科 　技 　大 　学 　学 　报 　　　　　　　Vol. 29 　Sup. Ⅰ 2001 年 　6 月 　　　 　　　 　J . Huazhong Univ. of Sci. Tech. 　　　 　　　　　J un. 　 2001 鸡传染性法氏囊病的 R TPCR 诊断方法的研究 荣 　俊 　余龙江 (华中科技大学生命科学与技术学院) ( ) 摘要 : 在研究鸡法氏囊病毒 IBDV 的A 片断 cDNA 结构的基础上 ,建立了 RTPCR 早期诊断技术. 结果表 明 ,使用 PrimerDesign 引物设计软件 ,在 VP5 和 VP2 的重叠基因区设计的一对引物具有非常高的同源性和保 守性. 采用的四种 IBDV 的标准毒株、一种野毒株和一例病鸡标本通过此引物进行 RTPCR 检测均得到了明 显的阳性扩增结果. 而两种其他鸡病病毒和一例健康鸡的法氏囊组织扩增均为阴性结果. 关 　键 　词 : 鸡 ; 法氏囊病毒 ; 诊断试剂 ( ) 中图分类号: S858 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 2001 s1006104 ( ) ( ) 　　传染性法氏囊病毒 IBDV 主要侵害 3 ～12 室赠送 ;鸡新城疫中等毒力活疫苗 Ⅰ系 由湖北 周龄的雏鸡及青年鸡 ,破坏鸡的免疫中枢器官法 省生物制品厂生产 ,批号 9737 ; 鸡传染性支气管 ( ) 氏囊中的B 淋巴细胞 , 导致鸡的免疫抑制 ,使鸡 炎病毒疫苗 H120 由湖北农学院高新技术研究 病鸡更易感染其他致病因子如新城疫、球虫病 所赠送. 上述病毒均置于 - 20 ℃保存. 等[1 ] . 此病的诊断较为困难 , 目前主要依靠病毒 1. 2 　主要试剂 ( μ ) 鉴定、血清诊断和病理解剖进行诊断. 从 1990 年 反转录酶为 MMLV 200 U/ L , Promega [2 ] 公司 产 品 ; TaqDNA 聚 合 酶 ( 5 U/ μ ) Bayliss 等 首先将 PCR 技术引入 IBDV 诊断以 L 为 ( μ ) 来 , 由于存在以下几方面的问题而没能在实际工 Pormega 公司产品 ; RNA 酶抑制剂 40 U/ L , 作中推广. 原因之一是由于该病毒的变异性很大 , SABC 公司产品 ; PGEM3Zf ( + ) / Hae Ⅲ Mrkers ( μ μ ) PCR 检测容易出现一些假阴性的检测结果 ;另一