原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗中残余细胞基质的检测.pdfVIP

中国生物制品学杂志2001年第 】4卷第 1期 OainJBioLogic．sis2001，Vo1．14．No．1 原代地鼠肾细胞乙脑灭活疫苗中残余细胞基质的检测 徐程林 唐巧英(北京生物制品研究所，北京 100024) 【摘 要】 目的 找出多批原代地鼠肾细胞乙型脑炎灭活疫苗高过敏反应发生率的原因，提出解决方案。方 法 利用HPLC排阻层析结合ELISA方法相对定量地分析高反应性和无反应性疫苗的残余细胞基质成分，并利用 凝胶过滤柱层析去除疫苗中细胞源性杂质。结果 高反应性疫苗中地鼠肾细胞基质成分的残留量偏高；利用常压 凝胶过滤柱层析法可将残留的细胞基质成分几乎完全去除。结论 本次过敏反应事件是由部分疫苗中地鼠肾细 胞基质成分残留量偏高所致 ．用一步分子筛柱层析处理疫苗是一种简单有效的解决办法。 关【键词】 乙脑灭活疫苗 过敏反应 地鼠肾细胞 乙脑灭活疫苗采用原代地鼠肾(p血mryh~qlTisteF 为了确定疫苗各峰性质，特制备 以下各 HPLC kld~y，PHK)细胞制备…。产品在病毒抗原、细胞基 样品： 质等成分的含量上难以稳定控制。PHK细胞基质蛋 3．1疫苗模拟溶液 (imitativevaccinesolutic~， 白致人过敏已在原代地 鼠肾细胞的狂犬病疫苗有所 IVS)：以Earle’s液按疫苗组成配制，含有 1mg／ml的 报道。另外，这一成分在牛体内也可诱生高滴度的 人白、0．05％的甲醛及50~ml小牛血清，而无病毒 roe抗体 。然而至今对疫苗中地鼠肾细胞基质蛋白 及细胞成分。 残留尚无质控要求。乙脑疫苗在 1997、1998两年大规 32PHK细胞维持液 (PHKcellmaitaJningmedi． 模接种时曾有多批因过敏反应率高而停止使用。本 um，t：CaMM)：将培养细胞用不含人白维持液洗换后 文为探求这些疫苗的高反应性与其残余细胞基质之 继续培养 12h，收集维持液低速离心取上清制得。 间的关系，对其中PHK细胞基质的含量进行了检测， 3．3纯化疫苗样品：为 VelrO细胞培养密度梯度 并提出了用一步分子筛层析纯化进行质控的方法。 超离心纯化的冻千乙脑灭活疫苗 M95—2批，还原 后 1：4稀释。 材料与方法 3．4PHK细胞裂解液：细胞超声波破碎后高速 1．主要试剂 离心取上清液，并采用 L 法测定蛋白浓度。 PHK细胞培养液由本所脑炎室制备；纯化 v一 将PHK细胞裂解液掺人 IVS中，细胞基质蛋白 细胞乙脑疫苗由本所中试二室制备；乙脑单抗、辣根 终浓度为 35vg／r~。 过氧化物酶标羊抗小鼠I 及酶标乙脑单抗均由本 4．相对效力的检测 所免疫诊断室提供 。 采用ELISA如 法，乙脑单抗包板，纯化苗(№5— 2．疫苗样品 2)经 1：64稀释作为参考疫苗，其效力定为 1．0trtml，与 根据北京市卫生防疫站乙脑疫苗反应情况报告， 各样品按 1：2．5—1：40两倍系列稀释后使用，孵育后加 将 1997、1998年度因接种反应大而废弃的8批疫苗作 ^酶标乙脑单抗，显色并测定A492nm。参考闻仲权 为高反应性疫苗样品，批号分别为：97021．1、97029-2、 平行线分析法计算各样品相对效力。 970o．10-1、9713241-1、970249—1、970366-1、97113-2、97121- 5．PHK细胞乙脑疫苗的柱纯化 3；而选择相应过敏反应率很低的8批作为无反应性 参考 v一 细胞乙脑疫苗柱纯化方法 J，采用 疫苗对照，批号分别为：98012-1、9801