定量PCR技术在食源性致病微生物检测中的应用_杜巍.pdfVIP

260 2006, Vol. 2 7, No. 04 食品科学 ※专题论述 定量PCR技术在食源性致病微生物 检测中的应用 杜 巍 (国家信息中心博士后科研工作站，北京 100045) 摘 要：食源性致病微生物是影响食品质量和安全的主要因素之一，建立和完善食品中致病微生物快速定量检测 技术具有重要的现实意义。定量PCR能快速、敏感、特异而准确定量，深入有效地利用该技术，必将有力促进 食源性致病微生物快速检测工作的发展。 关键词：定量PCR；致病微生物；快速检测 DU Wei Abstract： Key words：quantitative polymerase chain reaction(Q-PCR)；pathogenic microorganism；rapid detection 中图分类号：Q819 文献标识码：A 文章编号： 由沙门氏菌、弯曲菌、大肠埃希氏杆菌、李斯特 用研究重点，并作为食品中致病微生物快速定量检测研 菌等食源性致病微生物引发的食品污染，是影响食品质 发的一项关键技术。 量和安全的主要因素之一。因食源性致病微生物污染食 1 定量PCR的基本原理 品所导致的食源性疾病不仅会严重损害人体的健康，而 [1] 且很容易引起食品贸易纠纷 。随着现代食品安全控制 PCR(聚合酶链式反应)反应的基本原理为：在体外 技术如危害分析关键控制点(HACCP)、微生物危险性评 利用DNA聚合酶活性，在引物的引导和脱氧核糖核苷 估(microbiological risk assessment，MRA)的发展，以 酸(dNTP)等参与下将模板DNA在数小时内进行百万倍扩 及依据MRA建立的食品中致病微生物的限量标准等要 增。该酶促反应最基本的3个环节是：①模板DNA的 求，建立和完善食品中微生物快速定量检测技术越来越 变性，即在94℃下模板双链DNA变为单链DNA；② 具有重要的现实意义。 引物与模板链的特异性复性；③引物链的延伸。 聚合酶链式反应(PCR)技术问世20年来，在生物学 定量PCR(Q－PCR)就是在PCR反应中应用化学标记 基础研究领域得到了巨大的发展和完善，目前在疾病诊 [2～4] 的引物或探针，对扩增的标记产物进行定量 。近年 断、病原体检测等方面也有了越来越广泛的应用。近 来，在食源性致病微生物定量检测中研究和应用的定量 几年，在对扩增产物定性鉴别的技术基础上，又发展 PCR方法主要有：传统定量PCR(即：定量竞争性PCR、 了对模板DNA片段进行定量研究的方法，即定量PCR [4] PCR－ELISA法等)、实时定量PCR及免疫捕捉PCR等 。 (Quantitative PCR，Q－PCR)，成为当前分子生物学技 [2, 3] 2 定量PCR技术 术研究的热点之一 。由于该技术能快速、敏感、特 异而准确定量，因此也成为食品生物技术领域的一个应 收稿日期：2005-06-24 作者简介：杜巍(1973-)，男，副研究员，博士后，主要从事食品安全信息化研究。