新型环氧化物水解酶产酶菌株的筛选及产酶条件优化明飞平.pdfVIP

2009 年1 月 广西轻工业 第1 期（总第122 期） GUANGXI JOURNAL OF LIGHT INDUSTRY 食品与生物 新型环氧化物水解酶产酶菌株的筛选及产酶条件优化 1，2 1 1 明飞平 ，李从发 ，刘四新 （1 .海南大学食品学院，海南儋州 571 737 ；2.广州市微生物研究所，广东广州 51 0250） 【摘 要】 以苄基缩水甘油醚（Benzyl glycidyl ether ，BGE）为唯一碳源从土壤中筛选到了8 株环氧化物水解酶 （Epoxidehydrolase ，EH ）产酶菌株，其中一株黑曲霉G5 对映体选择性很高，能将BGE 立体选择性水解，保留(R )- BGE。该菌株 产生EH 的最佳培养基组成为：蔗糖1.0%、玉米浆2.0%、N aCl 1.0%，初始pH 为4.0 。250 mL 三角瓶装30 mL，120 r/ min 摇床上 30℃培养30h 后收集菌体，生物量和ee(Enantiomeric excess，对映体过量)值均达到最高。 【关键词】 环氧化物水解酶；对映体选择性；筛选；产酶条件；苄基缩水甘油醚 【中图分类号】 Q814 【文献标识码】 A 【文章编号】 1003- 2673(2009)01－06 －02 手性环氧化物是有机合成中非常重要的手性合成砌块，可 石油、动植物油，或被它们长期污染的土壤或水样，共30 以方便地合成许多有生物活性的手性化合物，因而在手性合成 个，采自海南各地。 和医药工业上具有极其重要的应用价值。 1.3 培养基 手性环氧化物的制备方法主要有化学法和酶法。 相比之 1.3.1 初筛培养基(g/ L) (NH ) SO 1.0g，K HPO ·3H O 6.0g， 4 2 4 2 4 2 下，由环氧化物水解酶催化的不对称水解反应制备光学纯的环 KH PO 3.0g，NaCl 0.5g，MgSO ·7H O 0.5g，CaCl 0.05g，pH 2 4 4 2 2 氧化物和相应的邻位二醇更具有吸引力：（1）外消旋环氧化物 分别调到6.0 和7.0 ，121℃，0.1 MPa 灭菌20 分钟，用前加入 的制备非常简单；（2）环氧化物水解酶来源广泛，底物谱广，选 0.1%的苄基缩水甘油醚。 择性好；（3）酶促反应不需要辅酶或金属离子的协助；（4）该 1.3.2 复筛培养基(g/ L) 初筛培养基中加入蛋白胨 10g，酵母 [1] 酶能在有机溶剂中发挥催化功能 。环氧化物水解酶广泛存在 膏4g，葡萄糖10g，121℃，0.1 MPa 灭菌20 分钟。 于植物和微生物中，它们有不同的底物特异性。动植物中的环 1.3.3 发酵培养基(g/ L) 玉米浆20g，蔗糖10g，NaCl 10g，pH 氧化物水解酶因其含量低，不利于提取而很难适用于工业化生