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PLptn真核载体的构建表达及其趋化活性测定.pdf
22 2010 ( 46 ) 7 Chin ese Journal of Veterinary Medicine
PLptn
柳 超, 蒋朋飞, 曹金锁, 张德礼
( , 712100)
中图分类号: Q78 文献标识码: B 文章编号: 2010)
, U pper: 5CGCAA GCT
, , T CCAT GAGACTT CT CAT C3, Low er: 5T AG
CXC, CC, CX3C C GAT CCCTACCCAGT CAGGGTT3PCR
( Lptn) C , 25 L, : 12. 5 L T aq DNA pol
CD8+ T NK ymer ase, ( 20 pmol) 0. 5 L, 1. 25 L
T , CD4+ , 10. 25 L ddH2 O: 95
T CD8+ T NK B 5 min, 30 ( 94 30 s, 56 30 s, 72 30 s) ,
[ 1] 72 10 min
Lptn
, Lptn 1. 2. 3 pEGFPPLptn PCR
[ 2] pMD18T ,
Za alaFlores L M
, pMD18TPLptn, DH5!,
, Lptn
pEGFPC1 ,
( PLptn) , pEGFPPLptn
( SU VEC) , 1. 2. 4 pEGFPPLptn SU VEC
, pEGFPPLptn,
1 SU VEC 6
, 80% ~ 90% , Lipofectami
1. 1 Trizol Reagent Lipo
neT M 2 000, 48 h
fectamine T M 2 000In itrogen , RTPCR
1. 2. 5 PLptn Western blot 48 h
Fermentas , pr emix T aq
, , , Western
DNA T4 DNA
blot AntiGFP anti
TaKaRa ( ) , A nti
body ( 1 ! 2 000) , HRP
GFP Antibody ,
Goat Antimouse IgG/ HRP ( 1 !3 000)
IgG/ HRP , 1. 2. 6
DMEM Gibco , 6 Pig Lptn ,
Costar , Western blot
( poly inylidene fluoride, PVDF) Milli 2
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