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第 34 卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究报告 第 4 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2006年 4 月 Ch ine se Jou rnal of A nalytical Chem istry 455 ～458 柱亲和介质用于内毒素去除的研究 唐守万 　孔 　亮 　欧俊杰 　邹汉法 (中国科学院大连化学物理研究所 国家色谱研究分析中心 ,大连 116023) 摘 　要 　以琼脂糖凝胶为基质 ,采用不同方法活化后 ,键合多粘菌素 B 配基 ,制备了 3 种用于内毒素去除的 亲和介质 。亲和介质的配基键合量及对内毒素的去除率随间隔臂长度的增加而增加 。考察了盐浓度 、pH、温 度及流速对亲和介质 3去除内毒素的影响 。结果表明 ,亲和介质 3 在 N aCl 浓度为 0. 05 ～0. 5 mo l/L , pH 为 6 ～10,温度为 25～55 ℃,流速为 0. 20 ～0. 80 mL /m in范围内对内毒素去除效果最佳 ,去除率大于 90 % 。 关键词 　琼脂糖凝胶 , 内毒素 ,多粘菌素 B ,亲和介质 ,去除率 1　引　　言 内毒素是革兰氏阴性杆菌生长时释放或死亡时由细胞壁裂解产生的一类脂多糖类物质 ,极微量 ( ) ng级 内毒素进入人体就会引起高热 ,腹泻 ,血管扩张 ,甚至昏厥或死亡 。因此 ,对医药制剂 、饮用水中 内毒素的去除一直是一项重要的任务 。去除内毒素的方法有活性炭 、离子交换树脂吸附 ,酸 、碱或氧化 剂化学分解 、膜过滤等 ,这些方法存在选择性差 、样品回收率低的缺点 。近年来 , 以组胺酸 、组胺 [ 1～5 ] 、多 粘菌素 B [ 6, 7 ] 等为配基的亲和色谱获得了巨大成功 。因为尽管不同来源的内毒素分子结构千差万别 ,但 其 L ip id A 部分都含有多个磷酸酯基 ,在一定条件下可呈电负性 , 同时 L ip id A 中的胺基葡萄糖基会与某 些特定的物质基团产生特异性亲和作用 。本实验以琼脂糖凝胶为基质 ,采用不同方法活化后 ,键合配基 多粘菌素 B ,制备了 3种用于内毒素去除的亲和介质 。考察了间隔臂长度对配基键合量及内毒素去除 的影响 。同时研究了亲和介质 3对内毒素去除的最佳条件 。 2　实验部分 2. 1　仪器和试剂 ( ) ( V 550 紫外 可见分光光度计 日本 J a sco 公司 ; H ZQ Q 全温振荡器 哈尔滨东联电子技术开发有 ) ( ) ( 限公司 ; LC10AD vp 泵 日本 Sh im adzu 公司 。多粘菌素 B 硫酸盐 PMB ,华美生物工程公司北京分公 ) ( ) ( ) ( 司 ; Sep haro se CL 4B 瑞典 Pharm acia公司 ;甘氨酸盐酸盐 北京石鹰化工厂 ;二甲基亚砜 DM SO ,天 ) ( ) ( 津市科密欧试剂开发中心 ;茚三酮 永嘉精细化工厂 ; 30 % H O 中外合资上海远大过氧化物有限 2 2 ) ( ) (