补肾方药延缓老年大鼠学习记忆退化的分子机制初探.pdfVIP

中医药生物化学与分子生物学通讯 补肾方药延缓老年大鼠学习记忆退化的分子机制初探宰 王亚娟金国琴戴薇薇张学礼徐品初 (上海中医药大学上海200032) 摘要：目的：观察补肾方药左归丸、右归丸对老年大鼠空问学习记忆能力，氨基酸神 经递质以及NMDA受体、Ca2+／CaMKIV信号通路相关分子的mRNA表达变化的影响，以探 讨老年大鼠学习记忆减退的分子机制以及补肾方药的药理作用。方法：以青年大鼠(5月龄) 为对照，以自然衰老大鼠(23月龄)为模型：Morris水迷宫法观察大鼠空间学习记忆能力； HPLC．荧光法检测大鼠杏仁核、海马氨基酸类神经递质含量；RT-PCR法检测大鼠海马NRl、 CaMKIV、CREB、c-los mRNA的表达变化；及补肾方药一左归丸、右归丸对老年大鼠上述 各项指标的影响。结果：与青年对照组比较，老年大鼠上述指标都有不同程度的异常变化， 而左归丸、右归丸可改善老年大鼠退化的空间学习记忆能力；降低老年大鼠杏仁核、海马 Glu的含量；显著上调老年大鼠NRl、CaMKIVmRNA的表达，对CREB及c．10smRNA的表 达也有升高。结论：左归丸、右归丸可以通过降低老年大鼠杏仁核、海马Glu含量、纠正 NMDA受体介导的CaMKIV信号通路的异常变化，改善老年大鼠空间学习记忆能力，延缓 衰老。 关键词：老年大鼠；空间学习记忆能力；氨基酸类神经递质：NMDAR；Ca2+／CaMK Ⅳ信号通路 衰老过程中，学习记忆能力逐渐减退。海马是学习记忆的关键部位，随增龄易遭受谷 receptor，NMDAR)介导的信号转导发生异常，影响海马的长时程增强 (10ng-termpotentiation，LTP)的形成，导致学习记忆功能退化。 老年性学习记忆减退属中医的“呆症”和“健忘”范畴，其病位在脑而本于“肾”。中 医强调肾虚、髓海不足是学习记忆功能减退的主要病机。左归丸、右归丸均为明代张景岳 《景岳全书》经典补肾方药。本实验以自然衰老大鼠为模型，主要从Glu及NMDA受体介 导的Ca2+／CaMKIV信号通路角度，观察老年大鼠学习记忆变化的分子机制，及补肾方药左 归丸、右归丸的作用。 1材料 l·1动物：雄性SD大鼠，清洁级，上海中医药大学实验动物中心提供。 l·2药物：左归丸：熟地、山药、枸杞子、山茱萸、菟丝子、鹿角胶、川牛膝、龟甲： 右归丸：熟地、山药、枸杞子、山茱萸、菟丝子、鹿角胶、炒杜仲、当归、肉桂、炮附子； 按原方比例常规水煎，浓缩，一70℃保存。 ·国家自然基金资助项目 上海市教育委员会重点学科建设项目资助(J50301) 中医药生物化学与分子生物学通讯 溴化乙锭，三羟甲基氨基甲烷，琼脂糖，谷氨酸等均为进口分装，甲醇(Sigma公司，HPLC Premier 级)。余常用试剂均为国产分析纯。引物由Primer5．0软件设计，上海生工生物工程 公司合成，见表l。 表1各指标的引物设计 引物名称 引物序列 产物长度(bp) NRI GGTATCAGGAATGC(卜-3’ 329 上游5’—TrC 下游5_毛GTGCTCGTGTC11TGGA．—3’ CaMKN TTCCCGTAGACAAAA——3’ 230 上游5’—CAC ATCAAGCCGTCCAAT-一3’ 下游5’—GAC CREB 上游5’—CTGCTTCCCTGTTCTTCA丌．_3’ 383 下游5’—．AGTGCCAACCCCGATrrACC__3 c—fos 上游5’—CATCTTATTCCTTICCCTTC(卜_3’ 375 TACCATT_-3’ 下游5’—GAC