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723N分光光度计使用细则 曲新鹤 （哈尔滨工程大学） 摘 要 本文以723N分光光度计为载体，简要介绍了一些分光光度计的使用问题，包括测量物质颜色、浓度、成分等要求；调“0”“100”操作；波长扫描作用、操作；定量分析等。 关键词 723N分光光度计 调“0”“100” 空白液 波长扫描 基线校正 分光光度计?。723分光光度计使用YOKE3.0专业分析软件，可实现标准曲线、动力学测试等功能丰富的测量方法，具有波长扫描、时间扫描、多波长测定、多阶导数测定（选）、双波长、三波长等多种测量方法，可满足不同测量的要求，可直接消除比色皿配对误差）结构的化合物常会发生互变异构现象，生成酮式异构体和醇式异构体。有的由于分子中碳碳双键（）的存在，而产生顺式异构体和反式异构体。有的又因碳链结构不同，而出现同分异构体等。由于这些化合物结构不同，因而表现出吸光度的差异。另外，由于某些溶质分子中由于存在某些极性基团或原子，如氢、羟基等，从而常会出现缔合现象，形成氢键或类似二聚体或多聚体的结构，会引起吸收峰的偏移或吸收曲线形状的改变，使测量结果不准确。 调“0”“100” 2.1 调“0”“100”的定义 723型分光光度计具有自动调“0”“100”的功能。调“0”即揭开比色皿暗箱盖（切断光路）时，使吸光度为0；调“100”即合上比色皿暗箱盖（闭合光路）时，使透射比为100%。 空白液的选择 调“0”“100”应对空白溶液进行，按下“调零/调满度”键即可。空白液即测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液。A 当试剂及显色剂均无色时，可用蒸馏水作参比溶液。 B 显色剂为无色，而被测试液中存在其它有色离子，可用不加显色剂的被测试液作为参比溶液。 C 显色剂有颜色，可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液。 D 显色剂和试液均有颜色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其它试剂均按试液测定方法加入，以此作为参比溶液，这样就可以消除显色剂和一些共存组分的干扰。E 如果改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色反应，可以把此溶液作为参比溶液消除干扰。针对单物质样品，通过对其进行，得出吸收图谱，与标准物质进行比对，可确定物质的性质”,这不是基线校正的最后结果。为检验基线校正的结果，可对空白液进行扫描，看结果是否为一条比较直的在零上的直线。如果波动较大，可重复进行基线校正，至结果稳定。 定量分析 吸收定律 定量分析用于测量未知溶液的浓度。 根据吸收定律 A=KCL 其中：A---吸光度 K---吸收系数 C---溶液的浓度 L---溶液的光径长度 由吸收定律可知，当入射光、吸收系数、和溶液的光径长度不变时，溶液的吸光度是和其浓度成正比的。所以可用已知浓度的溶液绘制标准曲线，然后用该曲线测量未知溶液浓度。 标准曲线的绘制 具体操作为，首先进入定量分析模式，设定波长为最大吸收波长，进行调零/调满度。然后建立标准曲线，有系数输入法、一点法、多点待定法。系数输入法需已知曲线，输入斜率K和截距B；一点法是建立过原点的曲线，需已知一标准溶液的浓度；多点待定多用于建立不过原点的曲线，需2-9份标准溶液，用线性回归的方法建立曲线。之后，放入未知浓度的溶液，选择“样品”选项可进入未知浓度溶液的测试。 总结 参考文献 刘劲杨 《分光光度计的使用与检定》 1993.11 朱明华《仪器分析》 2000.7