分光光度法..pptVIP

项目二 分光光度法 Spectrophotometry 第一节 物质的吸收光谱 一、基本概念 复色光：不同波长组成的光 单色光：单一波长的光 可见光：380 ~ 780 nm 紫外光：200 ~ 380 nm 互补色光：按适当的强度比例混合可成白光的两种颜色的光 白光 蓝 黄 红 青 橙 紫 青蓝 绿 物质的吸收光谱 互补色光示意图 二、物质对光具有选择性吸收 若溶液选择性吸收某种颜色的光，则溶液呈吸收光的互补色光。 如硫酸铜溶液选择吸收黄色光，故溶液呈蓝色 物质的吸收光谱 M(基态）＋h? M*(激发态) 选择性吸收：⊿E= h? 光子h?=hc/? ⊿E 不同物质， ⊿E不同，选择吸收光子能量也不 同，即吸收的波长不同 三、吸收光谱 ?max ? (2) (1) A 物质的吸收光谱 A:吸光度，物质对单色光的吸收程度 吸收光谱：A ~ ?作图 C2﹥C1 吸光度最大处的波长为最大吸收 波长，用?max表示。 ?max是定性鉴别物质的基础 不同浓度的溶液，?max不变，浓度 与峰值成正比，这是进行定量分析 的依据。 一般用?max单色光测定 第二节 分光光度法基本原理 一、Lambert-Beer law 透光率：透射光强度与入射光强度之比 T = It/I0 吸光度A：透光率的负对数 A = -lgT I0 = Ia+ It 分光光度法基本原理 一、Lambert-Beer 定律 1、Lambert 定律 一定条件下，某溶液吸光度 与单色光通过的液层厚度b成正比。  A = k1b 2、Beer 定律 一定条件下（液层厚度），单色 光通过溶液时，吸光度与溶液的浓度成正比。 A = k2C 3. Lambert-Beer 定律 A = ? bc A = ab? ? = aM 分光光度法基本原理 : 摩尔吸光系数 L.mol-1.cm-1 b :液层厚度 cm C: 量浓度 mol.L-1 a: 质量吸光系数 L.g-1.cm-1 ?: 质量浓度 g.L-1 ?(a) ,溶液对入射光吸收 。 ?103,可进行分光光度分析 例：浓度为0.150mmol/L某化合物 (Mr=251)溶液，在480nm波长处用2.00cm吸收池测得透光率为39.8%, 求?、a. 解： ?= A cb = -lgT cb = -lg0.398 0.150×10-3×2.00 =1.33×103L.mol.cm-1 分光光度法基本原理 一、Lambert-Beer 定律 a= ?/M= 1.33×103 251 =5.30L.g-1.cm-1 例：某有色溶液在1.00cm吸收池中，测得其透光率T=60%，若改用2cm的吸收池时，其T为？ 解： A = k b = - lgT b=1.00 时 A1= -lg0.6 b=2.00 时 A2 ＝2A1 ＝ -2lg0.6 = -lg0.36 T=0. 36 练习题： 1.在波长为508nm处，以邻二氮菲光度法测定某元素，该元素的溶液浓度为 2.5×10―4g/L，吸收池厚为2.0cm，测得其吸光度为0.190，已知该物质的ε为 21223.0，试计算该元素的相对分子质量。 2.称钢样1.500g，用酸溶解后，以过硫酸钾将其中的锰氧化成高锰酸根， 转移到100mL容量瓶内，稀释至刻度后，用1.0cm吸收池在520nm处测得 其吸光度为0.620，试计算试样中的锰含量（ε=2235、MMn=54.94） 3.某含铁约0.20％的试样，用邻二氮杂菲亚铁光度法ε=（１.１×104）测 定，试样溶解后稀释至100ｍL，用1.00cm的比色皿，在508nm波长下测 定吸光度。为使吸光度的测量引起的浓度相对误差最小，应当称取试样 多少克。（MFe=55.85） 3.丁二酮肟对含镍量为0.12%的某试样进行比色分析测定，若配制100毫升 试液，波长470nm处用1.0厘米的比色皿进行测定，计算当测量误差控制在 最小时，应称取试样多少克？(已知：ε=1.3×104，MNi=58.69) 第三节 可见分光光度法 一、分光光度计 光源 单色器 吸收池 检测器 信号放大器 显示器 二、单组份测定方法 （一）、标准曲线法 A C 0 取标准品配置一系列不同浓 度的标准溶液，置于液层厚 度相同吸收池，测定相应吸 光度，以A~C作图，得一条 通过原点的直线 Beer’s law 当?,b等一定，A与C成正比，A=