分子鉴定 2004 陕西省常见四种实蝇的RAPD研究初报(双翅目：实蝇科).pdfVIP

Vol. 26, No. 1 March, 2004 陕西省常见四种实蝇的RAPD研究初报 （双翅目：实蝇科） １ ２ ２ １ 张红梅 ，潘亚勤 ，魏迪功 ，仵均祥 （1.西北农林科技大学植保资源与病虫害治理教育部重点实验室, 西北农林科技大学植物保护学院，陕西 杨凌 712100； 2. 陕西出入境检验检疫局，陕西 西安 710068 ） 摘要：应用31 种随机引物对陕西省常见4 种实蝇的基因组DNA 进行扩增，筛选出5 种引物 S61、S107、S126、S275、S1142，可以对4 个种扩增出稳定清晰的多态性片 段，其中引物S126 可以把南瓜实蝇和具条实蝇，具条实蝇和三点棍腹实蝇分开；利 用UPGMA 法聚类构建的系统树与传统分类完全一致。 关键词：实蝇；RAPD；分子鉴定 中图分类号：Q969.456.8 文献标识码：A 文章编号2004)01-0059-05 实蝇为一种重要的有害生物类群，不仅对水果生产构成直接危害，而且对水果进出 口贸易也造成严重影响。世界上危害果蔬类的实蝇达150 余种，分布在不同的国家和地 区，各国政府均采取了严密的检疫措施，以防止检疫性实蝇的传入。目前，实蝇的分类 鉴定主要是以成虫的外部形态特征作为依据，但在口岸实际检疫工作中，截获的往往是 [1] 幼虫或卵，通常的作法是对其进行室内饲养待获得成虫后再进行鉴定 ，这样不仅延长 了进出口物品的通关时间，而且增加了检疫人员的工作强度。因此对实蝇进行准确快速 的鉴定，无论是在口岸检疫方面，还是在生产防治方面都具有重要意义。 RAPD 技术作为一种分子水平上的DNA 多态性检测的现代生物技术，因其简便、 快捷等特点而被广泛应用于昆虫基因组的多态性分析，特别是昆虫物种亲缘关系和系统 分类的研究。目前，该技术已被应用到同翅目、双翅目、直翅目、鳞翅目、鞘翅目等目 [3] 多个科的种类鉴定中 ，但对实蝇科昆虫的研究国内尚未见报道，为弥补这方面的不足， 我们利用RAPD 技术对陕西省常见4 种实蝇基因组DNA 的多态性进行了初步研究。 1 材料和方法 1.1 实验材料 实验用标本均为实蝇成虫，采用实蝇诱剂诱捕所得。其中诱捕南瓜实蝇（Bactrocera 收稿日期：2003-08-18 通讯作者：junxw@或junxw@ 59 60 昆 虫 分 类 学 报 第26 卷第1 期 tau ）、具条实蝇 （Bactrocera scutellaris ）和三点棍腹实蝇 （Dacus trimaculla ）的诱剂为 瓜实蝇引诱剂cuelure ，诱捕桔大实蝇 （Bactrocera citri）的诱剂为蛋白质诱剂。上述4 种实蝇均采自陕西省岚皋县城关镇柑桔园内。除引物S126 每种实蝇测试8 头外，其他 引物每种实蝇均测试3 头。 1.2 DNA 的提取 [4] 提取方法参考张迎春等(2002)的方法 ，提取到的DNA 片段大约22.6kb(见图1)。 1.3 引物 实验所用引物均为上海生工合成，编号及核苷酸序列见表1。 1.4 模板处理 用 Eppendorf 核酸蛋白检测仪测定供试样品的浓度，然后用三蒸水稀释至核酸含量 20ng/ìL。 1.5 RAPD 扩增反