中药复健片对MCAO大鼠脑内GFAP表达的影响.pdfVIP

中药复健片对MCAO大鼠脑内GFAP表达的影响1 1 2 1 1 3 付强 ，周永红 ，刘伟 ，郭春莉 ，指导：王新陆教授 1 山东中医药大学（250014 ） 2 青岛大学医学院（266021 ） 3 山东中医药大学（250014 ） E-mail ： fqtcm@ 摘 要：目的：研究中药复健片对MCAO 大鼠脑内GFAP表达的影响，探讨复健片治疗缺血 性卒中的作用机理。方法：用Tamura 的方法[1]进行右侧近端大脑中动脉电凝术造成MCAO 大 鼠模型。35 只大鼠分为给药组、模型组、假手术组3 组。于造模成功后第6 天药物组灌胃 给予复健片，剂量为 9g生药/kg/d ，余二组分别灌胃给予同等量生理盐水，日1 次。用免疫 组织化学法观察MCAO 大鼠脑内GFAP的表达。结果：药物组大鼠脑内GFAP 2 周内表达增 强，而3 周时表达降低。结论：复健片治疗缺血性卒中的作用机理可能是早期增强星形细胞 活性，从而调动星形细胞对神经系统损伤的各种修复机能，包括对轴突生长和突触重建发挥 多方面的积极作用；而后期降低GFAP的表达，从而抑制胶质瘢痕的形成，以解除神经功能 重塑的负面因素。 关键词：复健片；缺血性卒中；GFAP 表达 中枢神经系统内的胶质细胞和神经元共同形成一个统一的有机体，胶质细胞参与神经元 功能的调节，并在联系和维持神经元生存的微环境中起重要作用。而星形胶质细胞(Astroglia, As)是中枢神经系统最主要的大胶质细胞。脑缺血缺氧后，星形胶质细胞的反应性活化，对 神经元具有“双刃”作用[2] 。星形胶质纤维酸性蛋白(gial fibrillary acid protein, GFAP)特异性 地存在于星形胶质细胞中，且在活性星形胶质细胞中GFAP 的表达相对更多。因此，研究药 物对GFAP 的调控作用，可以使星形胶质细胞的功能扬长避短，对防治神经系统疾病具有重 要的意义。 1. 资料和方法 1.1 动物分组及造模 取雄性Wistar大鼠，体重约 280 －300g，随机分为假手术组、模型组（分设 1w、2w 、 3w组）、给药组（分设1w、2w 、3w组），每组各5 只，共35 只。按Tamura 的方法[1]进行 右侧近端大脑中动脉电凝术制备大鼠局灶性脑缺血（MCAO ）模型。 1.2 给药及取材 在造模的基础上给予复健片 （由山东鲁信药业有限公司生产，主要药物为何首乌、草决 明、桑寄生、海马、淫羊藿等）灌胃，给药组分别于造模成功后第6 天起开始给予复健片灌 胃，剂量为9g 生药/kg/d，假手术组与模型组分别给予等量的生理盐水。注：大鼠在进行右 侧近端大脑中动脉电凝术后，因伤口疼痛、舌肌瘫痪等原因严重影响动物主动进食，为了保 证其营养供应，特在每日早晨和晚间分别灌胃给予5ml 牛奶，并将普通大鼠饲料进行软化， 制作成球状投放入鼠笼中便于其摄取。分别于给药 1w、2w 、3w 时断头处死大鼠，取大鼠 脑组织，经固定后，冠状切取大脑，常规脱水石蜡包埋、制片，待测。 1.3 指标检测 1本课题得到高等学校教育部博士学科点专项科研基金（编号20040441018 ）的资助。 - 1 - 采用免疫组织化学法 （SABC 法）进行观察。GFAP 免疫组化试剂盒购自武汉博士德生 物工程有限公司，批号021008001 。 1.3.1 免疫组织化学染色 （1）石蜡切片常规脱蜡复水； （2 ）30%H O 1 份+蒸馏水10 份混合，室温5-10 分钟以灭活内源性酶，蒸馏水洗10min 2 2 ×3 次； （3 ）滴加复合消化液10min，蒸馏水洗3 次； （4 ）滴加正常山羊血清封闭液20min，不