抗核抗体（ANA）检测试剂盒（50人份）.doc

抗核抗体（ANA）检测试剂盒ntinuclear Antibodiy，ANA）是自身抗体中的一组抗体，指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。ANA靶抗原分布于整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。ANA阳性的疾病很多，最常见于弥漫性结缔组织病，如系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）、类风湿关节炎（RA）、硬皮病（SSc）等。在某些非结缔组织病和正常老年人也可出现低滴度的阳性。ANA检测在临床上是一个极重要的筛选试验，ANA阳性（高滴度）标志了自身免疫性疾病的可能性，ANA检测对风湿性疾病的诊断和鉴别具有重要意义。 ANA的检测以HEp-2细胞（人喉癌上皮细胞）作为抗原底物。具有核抗原丰富、特异性强、核大、细胞结构清晰、易于结果观察及荧光染色核型分析等优点。相对于传统抗原底物（鼠肝、鼠肾）在检测某些抗核抗体时有明显优越性，如抗SSA/Ro抗体、抗着丝点抗体、抗增殖性细胞核抗原（PCNA）抗体、抗rRNP抗体、抗线粒体抗体、抗各种细胞器抗体、抗细胞骨架抗体、抗细胞周期蛋白抗体等。 本试剂盒以HEp-2细胞为抗原，采用间接免疫荧光法（Indirect Immunofluorescence IIF）检测，在与病人待测血清反应后，加入荧光素（FITC）标记的兔抗人IgG抗体，最终在荧光显微镜下观察结果。 试剂盒组成： 名称 规格 数量 HEp-2细胞片 5人份/张 10张 荧光（FITC）标记二抗(10×) 200(l/支 1支 ANA阳性对照（均质型，直接使用） 300(l/支 1支 ANA阴性对照（直接使用） 300(l/支 1支 封片剂（直接使用） 1.5ml/支 1支 吐温（Tween-20） 2.0ml/支 1支 洗涤剂干粉 1升/袋 1袋 盖玻片 15片/袋 1袋 标本的采集处理和保存： 将洗涤用的PBS粉剂用蒸馏水溶解至1升，加入2ml吐温，混匀后作洗涤和标本稀释用。 将HEp-2细胞片从冰箱取出后，等待其恢复至室温后再剪开包装。 待测血清用洗涤液作1:40稀释后，随阳性对照和阴性对照分别加在抗原片的反应孔内， 20(l/孔，放置湿盒内室温孵育30分钟。 取出抗原片，用洗涤液轻轻从一端将反应液冲洗掉，浸泡至洗片缸内，静置5分钟后，再用蒸馏水冲洗1次。 将抗原片周边和反面多余洗涤液用纸擦去，滴加1:10稀释（用洗涤液稀释）荧光素标记抗体，20(l/孔，放置湿盒内室温孵育30分钟。 重复步骤4。 将抗原片周边和反面多余洗涤液用纸擦去，在反应孔内滴加封片剂（5-15(l/孔）后封片。 荧光显微镜下观察结果。 结果判断： 显微镜下可见HEp-2细胞分布均匀、胞浆丰富、细胞呈多边形伸展。ANA阴性时整个细胞无荧光或极弱的均匀荧光。ANA阳性时因靶抗原在细胞内所处位置的不同而表现不同的荧光染色模型，为接下来特异性较强的抗体检测提供了线索。常见的阳性荧光染色模型有下述6种： 均质型（homogeneous H）：胞核荧光均匀一致，分裂期细胞染色体呈浓集染色。此型与抗dsDNA抗体、抗ssDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体有关。 斑点型（speckled S）：胞核内荧光呈不同粗细程度的斑点或斑块状，核仁有时阳性，分裂期细胞染色体阴性。此型主要与抗可溶性核抗原（ENA）抗体有关。 核仁型（nucleolar N）：核仁染色，分裂期细胞染色体阴性。此型常与抗Fibrillarin抗体、抗RNA多聚酶I抗体、抗PM-Scl抗体、抗核仁形成中心（NOR）抗体有关，临床上多提示系统性硬化症（SSc）或重叠综合征。 核膜型（membranous M）：荧光染色集中在核膜边缘，重叠处浓染，核中央渐趋暗淡，分裂期细胞染色体阴性。此型主要与抗核胞膜蛋白抗体相关，包括抗板层素（lamin）抗体、抗板层素B受体（LBR）抗体、抗核孔蛋白（gp210、p62）抗体等，临床多提示原发性胆汁性肝硬化（PBC）。 核点型（dots）：胞核内散布大小较一致的荧光细小颗粒，数目较少时分裂期细胞染色体多为阴性，临床多提示原发性胆汁性肝硬化（PBC）；数目较多且分裂期细胞染色体区颗粒浓集时为着丝点型（centromere ），临床多提示系统性硬化症（SSc）的亚型CREST综合征。 胞浆型（cytoplasmic）：胞核阴性，胞浆荧光染色阳性。该型因荧光颗粒粗细大小、均匀程度和分布位置等不同而表现多种多样，多与抗细胞器（线粒体、溶酶体、核糖体、高尔基体等）抗体、抗细胞骨架蛋白等有关。 使用注意事项： 本试剂盒作定性检测，也可以对阳性标本倍比稀释（如1:80、1:160、1:320……）后作半定量检测。 未用完的洗涤液可以储存于冰箱内（＋2℃～＋8℃）下次继续使用。 对照血清经检测HBsAg、抗HCV抗体、抗HIV抗