人胰液双向凝胶电泳分离技术的建立和优化.pdfVIP

维普资讯 食品与药品 FoodandDrug 2007年第9卷第 04A期 5 人胰液双向凝胶电泳分离技术的建立和优化 刘骁 勇，韩金祥 ，崔亚洲 ，宗美娟 ，陈 或 ，田 美 (山东省医药生物技术研究中心 卫生部生物技术药物重点实验室，山东 济南 250062) 摘 要 ：目的 建立并优化人胰液蛋白质组的双向凝胶电泳分离方法。方法 通过比较几种常用 的体液处理方法 ， 确定了一种适于人胰液的蛋白质样品处理方法。经过一维等 电聚焦和二维SDS—PAGE电泳后，有效分离了人胰液 蛋白质组。结果 通过优化胰液蛋 白质提取、上样量和固相 IPG胶条分离范围的选择等步骤，建立了人胰液双向凝 胶 电泳的方法 ，并获得了分辨率较高、重复性较好的双向凝胶电泳图谱。 结论 丙酮沉淀与双向凝胶电泳技术的结 合是研究人胰液蛋白质组的一种有效的方法。胰液双向凝胶电泳方法的优化可为今后开展疾病相关的胰液蛋白质组学 研究提供技术基础。 关键词 ：蛋白质组学 ；人胰液 ；双向凝胶 电泳 中图分类号 ：0655．4 文献标识码：A 文章编号：1672—979X(2007)04—0005—05 EstablishmentandOptimizationofSeparationofHumna PnacreaticJuicebyTwo-Dimensional GelElectrophoresis LIUXiao—yong，HANJin—xiang，CUIYa—zhou，ZONGMei-juan，CHENYu，TIANMei (ShandongMedicalBiotechnologicalCenter,KeyLaboratoryforBiotech-Drugs，MinistryofHealth，Jinan 250062，China) Abstract：ObjectiveToestablishandoptimizethetwo—dimensionalgelelectrophoresisseparationofproteome inhumna pnacreaticjuice．MethodsBycomparingseveralcommonlyusedproteinexrtactionmehtods，amehtod forhtesepraationofproteomeinhumnapnacreaticjuicewasdeterminde．Theproteomeinhumanpnacreaticjuice waseffectivelyconcentratde nadsepraatedbyisoelectricfocusingonfirstdimensionnadSDS—PAGEonsecond dimension．ResultsByoptimizingtheexrtactionofproteinsinhumanpancreaticjuice，loadingamountand sepraationscopeofIPGstrip，theproteinsweresuccessfullyexrtactedfromhumnapancreaticjuicenadwere sepraatedbytwo—dimensionalgelelectrophoresiswihthigherresolutionna dbetterreproducibility．Conclusion Acetone。p‘recipitationcombinedwithtwo-·dimensionalgelelectrophoresisisasuitableapproachtostudythe proteomeinhumnapnacreaticjuice．Theoptimizationofhteseparationofhumanpnacreaticjuicebytwo-dimensional gelelectrophoresislaysatechnologicalfoundationforhte