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维普资讯 第3O卷 第 1O期 核 技 术 Vo1．30，No．10 2007年 1O月 NUCLEARTECHNIQUES October2007 纳米粒子PCR产物的纯化及AFM观察 米丽娟 1,2 李 宾 周化岚 王化斌 ， 胡 钧 1(中国科学院上海应用物理研究所 上海 201800) 2(中国科学院研究生院 北京 100049) 摘要 适量浓度的纳米金可显著改善PCR扩增的特异性，提高扩增的灵敏度和反应速度。本文比较了不同方 式处理纳米金优化后扩增产物的纯化效率 ，同时利用原子力显微镜(AFM)表征了扩增产物的形貌。结果表明， 直接纯化纳米粒子PCR产物的纯化效率较高，且纳米金不会对大量扩增产物造成影响，但可能影响少量DNA 的形貌；在乙醇沉淀DNA之前的高速离心步骤，虽纯化效率略为降低，少量DNA依然会随纳米金共沉降， 但可有效排除扩增产物中的纳米金。 关键词 PCR，纳米金 ，DNA纯化，原子力显微镜 中图分类号 06．05 利用多种添加剂，如有机小分子、高聚物或者 映生物分子的表面形貌，甚至可在生理状态下观察 蛋白等 西J，可明显改善聚合酶链式反应(Polymerase 生物分子的天然状态。Huu等报道了在氨丙基三乙 chainreaction，PCR)的某些重要特性。这是一种简 氧基硅烷(Aminopropyltriethoxysilane，APS)修饰的 单、有效地优化 PCR体系的方法。纳米金(Au 云母表面，利用AFM观察单个伸展的DNA分子的 nanoparticles，AuNPs)是近些年来发现的一种优化 研究工作。Rothemund[161则利用碱基之间的配对关 PCR反应的新型添加剂，LiH．K．等 发现，浓度为 系，构建并用AFM观察由DNA分子组成的各种纳 0．4—0．8nmol／L的AuNPs可抑制二次PCR扩增体 米尺度的几何图形。u 等u用AFM定位切割分离 系的非特异性条带的产生，且这种优化能力可在很 DNA分子，并对其进行单分子PCR扩增检测。总 宽的温度范围内有效。LiM．等 报道，0．7nmol／L 而言之，AFM是纳米尺度上研究物质结构、特性和 AuNPs在改善 PCR的灵敏度与加快反应速度方面 相互作用的有力手段。尤其是，轻敲模式原子力显 有很好效果。因此，利用纳米材料优化PCR反应， 微镜(TappingmodeAFM，TMAnV1)技术，利用AFM 具有一些独特的优点。然而，AuNPs自身的电学、 针尖与样品表面短暂而轻微地接触对样品成像，故 光学、热学等物理性质 及其与单链DNA和多种蛋 更宜于对生物样品的研究，也将有助于AuNPs优化 白质结合的生物学特性¨引，在优化PCR反应的同 的PCR产物的形貌观察，从而研究AuNPs对DNA 时，其复杂、综合的作用方式是否会影响PCR产物 产物有否影响。 及其进一步应用，尚有不少问题值得探讨。其中的 本文对常规PCR和AuNPs优化的PCR产物的 一 个明显问题，是AuNPs优化的PCR产物中常常 纯化效果进行 比较，建立了一种可应用于纳米粒子 会存在微量AuNPs红色沉淀。而且，对PCR体系 PCR产物纯化的方法；同时，应用TMAFM对扩增 添加AuNPs是一种新的PCR优化技术，则通常用 产物 DNA 的形貌和长度进行表征。结果表明，纳 于纯化 PCR产物的方法是否合适?是否需要建立 米粒子PCR产物没有发生可辨别的显著变化，从而 一 种针对该 PCR产物的纯化方法?对这些问题的 为其更广泛应用提供了依据。 研究，迄今未见相关报道。 近 些年来