基于电化学聚合固定抗体的电化学发光免疫分析法检测人免疫球蛋白.pdfVIP

第 37卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究报告 第 1期 　　　　 　　　　　　　　 　　　　 　　　　　　　　 2009年 1月 Ch inese Journal of A nalytical Chem istry 8～12 基于电化学聚合固定抗体的 电化学发光免疫分析法检测人免疫球蛋白 云 雯 　王晓英 　董 平 　朱金坤 　徐 颖 　何品刚　方禹之 (华东师范大学化学系 ,上海 200062) 摘 　要 　基于 电化学聚合在金 电极表面 固定兔抗人免疫球蛋 白 G 抗体与人免疫球蛋 白 G 及标记有 Ru ( bpy) 2 + 的羊抗人免疫球蛋白 G抗体之间发生特异性免疫反应 ,形成三明治结构 ,成功建立了用于测定人 3 ( ) μ 血清中免疫球蛋白 G的电化学发光 ECL 免疫技术 。利用此方法测定人免疫球蛋白 G含量 ,浓度在 50 g/L ( ) ( μ ) ～2 m g/L 范围内与电化学发光强度呈 良好的线性关系 ,线性回归方程为 y a. u. = 48. 4 1 + 0. 09x g/L ( ) μ ( σ) n = 7 ;检出限为 20 g/L 3 。测得正常人血清中免疫球蛋白 G平均含量为 11. 2 g/L ,结果令人满意 。 关键词 　人免疫球蛋白 G, 电化学发光 ,免疫检测 , 电化学聚合 1　引　言 免疫检测法具有快速 、灵敏 、选择性好等特点 ,被广泛应用于临床诊断、法医学 、药物学和环境科学 等研究领域 [ 1～6 ] 。特别是近年来 ,随着对免疫传感器的深入研究 ,发展了多种检测技术 ,包括电化学 、光 学 、压电检测 、放射免疫分析法和电化学发光检测法等 [ 7～12 ] 。其中 ,放射免疫分析法涉及环境污染问 题 ,酶免疫分析法受到酶保存和检测灵敏度的限制 ;荧光免疫法有光的散射和杂光的干扰等问题 , 限制 了其在免疫方面的应用 。电化学发光是一种由于电化学反应引起化学发光的现象 ,具有操作简便 、背景 信号低 、易于控制、特异性高等特点。Ru ( bpy) 2 + 化合物在电化学发光中是一种应用最为广泛的发光物 3 质 , 由于它具有灵敏度高 ,稳定性好 ,发光效率高等特点 ,所以被广泛用于实际生物样品的分析检测 [ 13, 14 ] 。 ( ) 免疫球蛋白 IgG 是人体血清中含量最高的抗感染抗体 ,约占血清免疫蛋白的 70% ～80% ,其含量 的高低往往作为慢性感染 、慢性肝病 、免疫性疾病等疾病的参考值 ,所以对其含量检测意义重大 。现有 IgG检测方法有压电免疫传感器技术 [ 15 ] 、酶免疫法 [ 16 ] 和荧光免疫法 [ 17 ] 等 。 对于生物传感器 ,生物分子固定的数量和活性是非常重要的 ,直接影响传感器的性能 。传统的固定 方法 ,如硅片上的硅烷化固定技术 、金电极表面的巯基 自组装法以及戊二醛等化学试剂组装法等 ,操作 复杂 ,组装时间长 ,难以保持生物分子的活性 。采用吡咯和生物分子共聚的方法 ,不但操作简便 、耗时 少 、易于控制 ,还能适用于微电极及微量试剂的选择性固定 。这种方法常用于酶传感器 、安培传感器及 电位