一株猪源屎肠球菌的分离鉴定及益生功能初步研究.pdfVIP

中国畜牧兽医 2012年第39卷第7期 兽医临床 ·231· 一株猪源屎肠球菌的分离、鉴定及益生功能初步研究 王凡，王建设。刘婷，李晓清。王安如 (北京大北农科技集团股份有限公司。饲用微生物工程国家重点实验室，北京 100193) 摘要：从健康仔猪粪便中分离刘一株乳酸菌ZW002，并从形态．生理生化指标，16SrRNA基因序列分析，鉴定该菌铼为屎 肠球菌(Erezrococcusfaecium)．将其16S 进行益生功能初步研究，结果表明，菌株ZW002表现出良好的耐受性及益菌性能，为猪用微生态制剂的研究开发奠定了基础。 关键词：益生菌；屎肠球菌；鉴定；益生性能 率围分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：187l-7236(2012)07-0231-03 益生素(probiotics)是一类能通过调控生物体Taq酶、dNTP等购于北京康为世纪生物科技有限 微生态平衡进而有效促进宿主健康和生长的活微生 公司；PCR反应引物由上海英骏生物技术有限公司 物制剂，又被称为活菌制剂、微生态制剂等(Golden， 合成；常规化学试剂购于北京奥博星生物技术有限 1998，Fioramonti等，2003)。微生态制剂具有绿色公司；产肠毒素性大肠杆菌K88和K99菌，由饲用 安全、无毒、无残留等优点，并且在增强禽畜免疫力， 微生物工程国家重点实验室保存。MRS液体培养 提高生长性能、降低死亡率等方面具有良好功效，已 基：蛋白胨lo g，酵母浸膏5 g，牛肉浸膏10 g，葡萄 经在作为饲料添加剂得到广泛应用，以减少抗生素 糖5g，K2HPO；2g，柠檬酸氢二铵2g，乙酸钠5g， 类添加剂使用量。使用最早、最广泛的微生态制剂 Tween--801 mL，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0．58g， 是乳酸菌制剂，其次是芽孢杆菌制剂和真菌及酵母 硫酸锰0．25 g，加蒸馏水定容至1000mL，调pH为 类制剂。屎肠球菌属于乳酸菌，在很多新出生2～ 7．0，121℃灭菌20rain。MRS固体培养基：在 3 d的动物内占优势地位(Devriese等，1991)，具有 MRS液体培养基的基础上加入1．5％的琼脂。筛 生长速度快，对肠道具有较好黏附力，易于培养与保 选培养基：MRS固体培养基中添加0．75％CaCO。。 存，能产有机酸、细菌素等抗菌物质(Maia等，2001) 1．2菌株的分离与纯化无菌采集动物粪便1g， 的特点，因而相对于双歧杆菌等严格厌氧型乳酸菌 用无菌生理盐水梯度稀释后取0．1mL涂布于含有 更便于商业化应用。1989年美国FDA就公布它为 可直接用于动物的菌种之一，国内的许多微生态产 养。48h后挑取钙圈明显，表面光滑凸起，周边整 品中都添加有屎肠球菌。显示出其在畜牧生产工业 齐，直径1．0～1．5mm的菌落，划线接种于MRS 中广泛的应用发展翦景。本研究从健康仔猪粪便 培养基上，涂片，革兰氏染色镜检，筛选革兰氏阳性 中，分离得到一株乳酸菌ZW002。利用常规形态、 菌株。将筛选菌株在MRS平板上划线接种，获得 生理生化试验及分子生物学试验相结合的多相分类 纯培养。 技术(Colwoll，1