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凝集素基因克隆以及功能研究 1 1 1 2 林春江 ,杨义 ,马振华 ,李成久 1大连水产学院生命科学技术学院 （116023） 2辽宁省水产种苗管理局 （116015） E-mail ：yangyi0403@163.com 摘 要：凝集素研究近年来发展迅速。本文从凝集素的分布、结构、分类、理化性质以及基 因克隆等方面进行了综述，并讨论了凝集素基因在植物基因工程中的应用。 关键词：凝集素，功能，分布结构，基因克隆 1．凝集素定义的不断深化 早在1888 年，俄Dorpt大学的Herman Stillmark偶然间观察到蓖麻籽的蛋白提取物能凝 集血红细胞，从而开始了植物凝集素的研究。但直到本世纪60年代，人们认识到凝集素在生 物体内具有多种重要生理功能，在医药、农业上具有巨大应用前景，凝集素的研究文献才开 始大量涌现(Etzler,1985)。植物凝集素 （Lectin）一词来源于拉丁文 “Legere”,意思是选 择，以强调其能选择性地与糖复合物相结合的特性。一般说来，植物凝集素是指能可逆结合 特异单糖或寡糖的蛋白质。但伴随着植物凝集素家族成员的增加，对其结构、功能研究的深 入，分子生物学水平上新的发现，植物凝集素的定义已几经修正。最近Peumans等认为一蛋 白质被定义为:Lectin 的唯一前提是至少应有一个非催化结构域，且其能可逆结合在特异碳 水化合物上。因此现在植物凝集素定义为：含有至少一个非催化结构域并能可逆结合到特异 单糖或寡糖上的所有蛋白质(Peumans,1995)。 2．凝集素的结构 凝集素是一种糖蛋白，它有依赖共价键相连结的蛋白质和糖两个部分，蛋白质占的百分 比大，糖的含量较少。一般都是几个单糖构成寡糖链，寡糖链再以两个方式与蛋白质肽链相 连，分别构成 N-连接寡糖蛋白和 O-连接糖蛋白。 2．1 N-连接寡糖蛋白 先在粗面内质网和高尔基复合体中合成 N-连接寡糖，此过程与蛋白质肽链的合成同时 进行。合成过程是在内质网上 以长萜醇作为糖链载体，在糖基转移酶的作用下，先将 UDPGLcNAc 分子中的 GLcNAc 转移至长萜醇，然后再逐个加上糖基，形成 N-连接寡糖链。此 寡糖链再作为一个整体转移至蛋白质肽链的糖基化位点上，即糖蛋白氨基酸序列上的 Asn-x-Ser/Thr(其中 x 可以是脯氨酸以外的任何氨基酸) 等三个氨基酸组成的序列子上， 一般是和天冬酰胺残基的酰胺氮连结， -1- 2．2 O-连接糖蛋白 首 先 也 是 先 合 成 O-连 接 寡 糖 ,O-连接寡糖的合成是在蛋白质多肽链合成后 进行的，合成过程中不需要糖链载体，只在 GalNAc 转移酶作用下，将 UDPGLcNAc 分子中的 GLcNAc 基转移至多肽链的丝氨酸或苏氨酸的羟基上，形成 O-连接寡糖，即： 然后再逐个加上糖基，直至完成糖蛋白的合成。 3．凝集素的分布和功能 凝集素广泛分布于植物、动物和微生物中。目前已有1000多种植物被报道含有凝集素 （1） ，它们在植物根、茎、叶、花、果实、种子、汁液中广泛分布，可存在于细胞膜上、细胞质 （2） 内和细胞外基质。自Ashwell和Morell发现肝细胞凝集素 以来，人们在高等动物体内陆续 发现了多样的凝集素，大量分布在血清、卵、淋巴细胞、精子等不同部位。已发现的微生物 凝集素一般分布在体表，胞质中少见。Pseudomonas aseruginosa是原核生物中仅知的分布 （3） 于胞质内的凝集素 。凝集素的功能似乎