木鳖子提取物对AsiaIO型口蹄疫双价灭活苗的免疫佐剂作用.pdfVIP

木鳖子提取物对Asia I-O 型口蹄疫双价灭活苗的免 疫佐剂作用1 1 2 1* 陈婉君 刘迪文 胡松华 1浙江大学动物科学学院，（310029 ） 2浙江大学医学院，（310031 ） E-mail:songhua@ 摘要：分别将2500 μg 、500 μg 、100 μg 或20 μg 的木鳖子提取物（ECMS ）或100 μg 皂 树皂甙（QA ）和Asia I-O 型口蹄疫双价灭活苗混合免疫豚鼠，以不另加佐剂的疫苗为对照 组，于二免后3、6、10、14 周采血并分离血清，观察血清中抗O 型口蹄疫病毒的抗体滴度、 抗O 型口蹄疫病毒VP1 结构蛋白抗体水平和抗Asia I 型口蹄疫病毒的抗体水平的变化。结 果表明，当ECMS 剂量等于或少于500 μg 时，ECMS 和口蹄疫双价灭活苗混合免疫豚鼠后， 未见不良反应；疫苗中加入ECMS 和QA 后比对照组可以诱导出更高的抗O 型口蹄疫病毒 抗体滴度、抗O 型口蹄疫病毒VP1 结构蛋白抗体水平和抗Asia I 型口蹄疫病毒的抗体水平， 其中ECMS100 μg 组以及QA100 μg 组和对照组比较有显著性差异（P0.05 或p0.01 ）；且 ECMS100 μg 组抗体水平要高于 QA100 μg 组。因此，本研究结果说明ECMS 是口蹄疫疫 苗的候选佐剂。 关键词：木鳖子提取物；ECMS；免疫佐剂；口蹄疫灭活苗；豚鼠 1 引言 口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)引起的偶蹄动物烈性接触性传染病，主要危害牛、羊、猪等家畜。FMDV属于小RNA病 毒科,口蹄疫病毒属, 含有4种结构蛋白，分别为VP1 、VP2 、VP3 、和VP4[1.2] 。该病毒有七 个血清型和众多亚型，各血清型之间无交叉保护反应[3]。在亚洲主要流行A、O、C、Asia I 四个血清型，致病性各不相同。口蹄疫传播途径多、传播速度快,曾多次在世界发生大流行， 从而造成巨大的经济损失。使用口蹄疫灭活疫苗仍是我国预防与控制口蹄疫爆发的主要手 段，但是就目前的使用情况来看，口蹄疫灭活苗免疫效果并不十分理想[4.5.6]。 木鳖子始载于宋《开宝本草》（公元 973 年），能消肿散结、祛毒、治痈肿、疗疮、无名 肿毒等。木鳖子的化学成分主要包括脂肪酸类，皂甙，活性蛋白类、α-菠菜甾醇、齐墩果酸 和木鳖子酸等成分。最近的研究发现木鳖子的一种水提取物具有抗肿瘤[7.8.9]以及抗氧化活性 1本课题得到浙江省科技厅(项目编号:2004C32047)资助。 * 通讯作者。电话：0571；传真：0571。 - 1 - [10]。Iwamoto等[11]从木鳖子中分离出两种皂甙，momordica saponin Ⅰ和Ⅱ，并确认为 Ⅰ为丝 石竹皂甙，Ⅱ为一种含皂皮酸的皂甙。丝石竹皂甙为含双糖链的三萜皂甙。一些具有类似化 学结构的皂甙已被证明具有免疫佐剂作用，和疫苗同时使用可以提高疫苗的免疫效果 [12.13.14]。我们的前期研究证明，木鳖子提取物具有免疫佐剂作用。本研究以豚鼠为实验动物， 探讨利用木鳖子提取物来增强口蹄疫灭活苗的免疫效果的方法。 2 材料与方法 2.1 实验动物 普通级 DHP 花豚鼠 35 只，浙江大学实验动物中心提供。 2.2 佐剂 木鳖子提取物（ECMS ），本实验室分离提取并保存；皂树皂甙(QA)，丹麦 NOR-VET 公司产品。 2.3 疫苗 Asia I-O 型口蹄疫双价灭活苗，内蒙古生物药品厂生产。 2.4 主要试剂 山羊抗豚鼠IgG、IgG1 、IgG2