鲶鱼骨蛋白酶解物中抗菌活性物质的初步分离纯化.pdfVIP

鲶鱼骨蛋白酶解物中抗菌活性物质的初步分离纯化。 张建荣1，马俪珍2，梁鹏2 1(山西农业大学食品学院，山西太谷，030801)2(天津农学院食品科学系，天津，300384) 摘 要 用胃蛋白酶酶解鲶鱼头、鱼骨，酶解得到抑菌活性较高的鲶鱼骨酶解液，然后对酶解液进行初步分离与 3000 G-15凝胶层析分离纯化，采用比 纯化。鲶鱼骨虽白抑菌活性最强的酶解物经过超滤(Mw u)和Sephadex 浊法和滤纸片法测定其抑菌活性。结果表明，分离纯化后，酶解混合物对大肠杆菌、藤黄微球菌以及枯草杆菌的 抑茵活性都有一定的提高，其中层析后峰2的抑菌活性最强，峰2对大肠杆菌、藤黄微球菌以及枯草杆菌的抑菌 500 活性要比酶解粗品提高1倍左右，且各组分的平均分子质量均在1 u以下。峰2经反相高效液相色谱分析 得出，组分由70多种物质组成，要想得到纯的抗茵活性物质还需要进一步深入研究。 关键词 鲶鱼骨，酶解，抑茵活性肽，分离纯化 目前对肽类物质分离纯化的方法有许多种，常用 G-25和聚丙烯酰胺凝胶电泳分离等，从林蛙皮肤中 的分离方法有：超滤法、凝胶过滤层析、凝胶电泳、离 分离获得5种小分子多肽。Wang凹?对小麦蛋白进行 子交换树脂、反相高效液相色谱、快速蛋白质液相色 酶解，并对酶解物进行超滤，发现超滤后酶解物的功 谱等[1]。JeonnCz]等应用超滤技术对鳕鱼蛋白水解 能特性显著提高，他认为酶解物的功能特性与分子质 物进行分离纯化，获得3个部分的肽片段，10～30量的大小有紧密的关系。 ku的肽片段具有优良的乳化特性和搅打性能，分子 本试验拟采取超滤法和凝胶过滤层析法对鲶鱼 质量量介于3～i0ku的肽片段，其抗氧化性能很高， 骨蛋白酶解液进行初步分离纯化，然后用反相高效液 而分子量小于3ku的肽片段，具有显著的抑制ACE 相色谱对分离组分进行纯度的研究。对所得纯化产 的活性；Jiun-RongchenE3]等用胃蛋白酶酶解大豆分 物的抑菌性进行测定，并将酶解物粗品、超滤后组分 离蛋白，采用凝胶色谱柱和离子交换分离得到的分子 以及层析后组分进行抑菌活性的比较。 000 质量在300～5 u的小分子肽具有很好的生理免 1 材料与方法 疫功能。Kim[41等利用三步超滤和反相高效液相色 谱法从明胶的水解物中分离出2条具有抑制ACE活1．1试验原料 性的三肽；Jang[53等人用超滤、凝胶过滤色谱和反相 革胡子鲶鱼头及骨(购自天津市王顶堤水产批发 高效液相色谱联合的方法从牛肉蛋白水解物中分离 市场)。 出氨基酸序列为Val—I。eu—Gin—Tyr-Lys的ACE抑制 1．2主要试剂 肽；Je[6]将阿拉斯加青鳕鱼骨架蛋白酶解物通过SP- 胃蛋白酶(pH G-25柱，用NaCl进 SephadexC一25，再经Sephadex 津诺奥酶制剂公司；葡聚糖凝胶SephadexG-15，瑞 行线性洗脱，收集具有抗氧化活性的流出液，再用 3 000 u)，美国