核酸荧光探针TOTO单体噻唑橙的合成新路线研究.pdfVIP

第四届全国青年精细化工会议论文集 核酸荧光探针TOTO单体噻唑橙的合成新路线研究 宋健冯荣秀陈磊王军波谢扬 (天津大学药物科学与技术学院，天津。300072) 摘要；本文研究设计了以2-巯基苯并噻唑和4-甲基喹啉为主要原料。合成核酸荧光探针 TOTO单傩噻唑橙(TD)的工艺路线．采用碘甲烷和对甲苯磺酸甲醮．先后对2-藐基苯井 噻唑进行了巯甲基化和氨甲基化反应，收率分别为92．4，0和91％．其后，用4-甲基喹啉与 1,3-二澳丙烷反应·并将其产物与两步甲基化后产物反应，合成了目的产物TO，后两步收 率分别为52．5％和61．2％。经核磁共振谱鉴定产品结构正确．从而证明了通过该路线可以合 · 成TOTO单体． 关键词：噻唑橙4．甲基喹啉2．巯基苯并噻唑荧光染料 随着生物技术的不断发展，对于核酸标志的要求越来越高，最早用的磷同位素法，通过 同位素效应来进行DNA分子浏序．现在荧光染料的应用随着荧光光谱技术和散光技术的不 断发展，在蛋白质和核酸检测、毒物分析和临床医疗诊断等方面都得到了广泛应用，如免疫 检定法、流式细胞仪、染色体原地杂交、DNA自动测序、肿瘤的早期诊断等． 到目前为止，国内未出现对此类荧光探针染料合成方面研究的报道。‘1992年美国搽针 公司研究出一系列的核酸标志荧光染料产品，其中包括噻唑橙二聚体(TOTO)，喙唑黄 (YOYO)等．该公司与加州大学伯克利分技，提出了以2-巯基苯并噻唑和4-甲基喹啉衍生物 为原料合成噻唑橙单体fro)．以l’3-四甲基丙二胺连接单体的姗合成路线||～．1995年， 德国科学家提出用2-氨基苯并噻唑代替2．巯基苯并噻唑与4．甲基喹啉衍生物反应嘲。1999 反应．合成TOTO单体州．另外，还有一些文献报道了TOTO的合成，但基本上都是由单体 的碘盐与四甲基丙二胺来合成，只是在合成TO单体的过程I}f及合成TOTO=聚体的工艺条 件上有所不同p4l。 本文在对文献报道综合分析的基础上．提出了一条新的TOTO单体噻唑橙的合成路线 并对关键合成反应进行实验研究，并得到较高的收率。 1合成路线设计 噻唑橙的合成路线如图1所示，此合成路线的前两步反应按照文献111的思路设计．先用 碘甲烷对2·巯基苯并噻唑的巯基进行甲基化，然后用对甲苯磺酸甲酮对杂环上的氯进行甲 基化，得到3．甲基．2一甲巯基苯并噻唑的对甲皋磺酸盐。其后的合成路线未采用文献中nl先用 碘化钾置换对甲苯磺酸盐的路线，而是借鉴文献lq用l’3．二澳丙烷与4-甲基喹秣反应，生成 4．甲基-l一(3一溴丙烷)喹啉的溴盐。第四步反应用前面生成的喹啉澳盐与3．甲基-2．甲巯基苯并 噻唑的对甲苯磺酸盐反应，反应后用碘化钾的碘离子将澳离子和对甲苯磺酸根离子置换出 来，使台成产物变为碘盐。从而得到1D单体．这一合成路线未见文献报道，以下将对其进 行探索性研究。 第四届全国青年精细化工会议论文集 q瓢∥ 尹q． 》 c屿孚Ⅳ5、 ‰}卜帆 + + BrCHzCH2C啦Br ∞ 3 ．堕坠! I KI —obsH 4 图1噻唑橙单体(TO)的合成路线 2试验部分 2．1原料及分析方法 所使用的原料2．巯基苯并噻唑、l，3．二溴丙烷、对甲苯磺酸甲酯、4-甲基喹啉、--K,胺、 碘化钾等均为试剂级。 400MHz核磁共振仪进行定性分析。 产品采用Varian 2．2试验方法 2．2．1 2-甲