基于牛血清白蛋白偶联微球的蛋白-药物结合常数快速测定方法研究.pdfVIP

第43卷第 7期 应 用 化 工 Vo1．43No．7 2014年7月 AppliedChemicalIndustry Ju1．2014 基于牛血清 白蛋白偶联微球的蛋白-药物 结合常数快速测定方法研究 吕波，贾桂颖 (天津大学 药物科学与技术学院，天津 300072) 摘 要：以氨基化多孔微粒为固相介质，牛血清 白蛋白(BSA)为模型蛋白，通过戊二醛交联反应，制备牛血清 白蛋 白偶联微球 ，与药物结合 ，通过离心沉降微球，高效液相色谱法测定上清液中药物浓度的变化 ，并代人Rosenthal模 型，研发出一种新型方法用于药物蛋白结合常数(K)的快速测定。利用该方法测定了瑞替加滨与BSA的结合常 数，并与传统荧光光谱法对比，两种方法结果一致。键合蛋白微球经PBS缓冲液充分洗脱后 ，可重复利用。 关键词：牛血清 白蛋 白；瑞替加滨 ；微球；结合常数；荧光滴定 中图分类号：TQ021．9；O642 文献标识码：A 文章编号：1671—3206(2014)07—1341—05 Research fortherapiddetermination ofprotein drugscombinedconstantbasedon thebovineserum albumin coupledmicrospheres Bo．JIA Gui—ying (SchoolofPharmaceuticalScienceandTechnology，TianjinUniversity，Tianjin300072，China) Abstract：Aminoporousparticlesasthesolidmediumandbovineserum albumin(BSA)astheprotein model，topreparetheBSA couplingmicrospheresusinghtecouplingagentglutaraldehyde．Combinedwith drugsthroughcentrifugalsedimentationmicrospheres，HPLCmethodwasdevelopedforthedetermination ofdurgconcentration in supematantfluidbeforeandafterbalance，andthrough Rosenthalmodel，estab- lishedanewandrapidmethodtodeterminehtebindingconstant(K)．RetigabineandBSAbindingcon— stantwasdeterminedusingthismethod，theresultwasconsistentwiththetraditionalfluorescencetitration method．TheusedBSA couplingmicrosphereswereelutedwithPBSandcanbereused． Keywords：bovineserum albumin；Retigabine；microspheres；bindingconstant；fluorescencetitration 药物经给药部位吸收人血，在人体 内通过与蛋 备特殊的键合蛋白的色谱填料并进行装柱；核磁共 白迅速可逆的结合，从而影响到药物作用的产生、发 振分析法虽获得信息量大，但是测定周期长，仪器昂 展和消除。研究药物与蛋 白结合机理、结合常数 、部 贵，且不利于定量分析，对蛋白纯度要求也极高。磁 位、作用力等不仅对药物代谢动力学，临床用药有一 性微球曾被用于药物蛋白结合常数测定 5制，最近王 定意义，且对药物分