R31L TNF-α突变体重组质粒的构建、真核表达及其产物的胞毒效应.pdfVIP

刘丽丽等 POlL F．a突变体重组质粒的 建、真核表达 基 塑的堕壹 应 筮 · 967 · · 分子与细胞免疫学 · R31LTNF．突变体重组质粒的构建、真核表达及其产物的胞毒效应① 刘丽丽 万 琳 尹丙姣 杨 林 曾庆岭 李清芬 李卓娅 (华中科技大学同济医学院免疫学研究所，武汉430030) 中国图书分类号 R392．111 文献标识码 A 文章编号 1000-484X{21~ )11-0967-06 [摘 要] 目的：研究膜型、分泌型TNF-ct的31位氨基酸在其生物学效应中的作用，进一步探讨TNF-t~结构与生物学效 应的关系。方法：采用重叠PCR方法将 wt a31位精氨酸(R)密码子(CCC)定点突变替换成亮氨酸(L)密码子(cI℃)，构建 R31LTNF-a-pcDNA3．0重组质粒，经酶切、PCR及DNA测序鉴定后，采用脂质体转染法将其瞬时转染COS-7细胞进行表达，通过 MTr法检测R31L d突变体的胞毒效应。结果：酶切、PCR及测序鉴定证实目的基因R31L q正确连接到pcDNA3．0的 多克隆位点；THE-a31位突变可增强 sTNF-a的胞毒效应 ，突变体的CC50值是野生型的1／1