一种快速检测蛋鸡沙门氏菌的方法.pdfVIP

2015年 1月 四川大学学报 (自然科学版) Jan．2015 第 52卷 第 1期 JournalofSichuanUniversity(NaturalScienceEdition) Vol_52 No．1 doi：103969／j．issn．0490—6756．2015．01．032 一 种快速检测蛋鸡沙门氏茵的方法 李婉丽 ，徐文龙 ，李 松 ，余 洋 ，孙 群 (1．四川I大学生命科学学院，成都 610064；2．四川I圣迪乐村生态食品股份有限公司，绵阳 621000) 摘 要 ：为检测蛋鸡泄殖腔拭子 中沙门氏茵，在基础培养基BPW 的基础上 ，优化 出了培养仅 需 6h的选择性增菌液SEM；并根据蛋鸡泄殖腔拭子中的非沙门氏菌干扰 菌种类 ，设计 了沙 门氏茵特异性检测引物 hilAP3．结果表 明：1)低数量(1～5CFU／50mL)沙门氏菌在优化后 的一步法选择性增菌液 SEM 中培养 6h后，其生长量可达 10。CFU／mL以上，可满足PCR 方法的检测限(10CFU／mL)；2)hitAP3引物能排除蛋鸡泄殖腔拭子 中的j#I／1标茵的干扰 ， 特异地检测其 中的沙 门氏茵；3)建立的SEM 增菌 6h与hilAP3特异 引物 PCR联用的方法检 测灵敏度为 1～5CFU／50mL，准确率为 100 ．因此，该研 究中建立的优化增茵液与PCR联 用法能在 9h内完成沙门氏菌的检测，其灵敏度和特异性高，可应用于蛋鸡场的沙门氏菌检 汲q． 关键词 ：蛋鸡 ；沙门氏菌 ；增菌液优化 ；快速检测 中图分类号 ：$852．61 文献标识码 ：A 文章编号：0490—6756(2015)01—0181—06 A rapidmethodfordetection ofSalmonella in layinghens LIWan—Li，X 【，Wen—Long ～，LISong ，YU Yang ，SUN Qun (1．CollegeofLifeSciences，SichuanUniversity，Chengdu610064，China： 2．SichuanSundailyVillageEcologicalFoodCo．，Ltd．，Mianyang621000，China) Abstract：Theaim ofthisstudywastodevelopamethodfortherapidandspecificdetectionofSalmonel— Z口inthefecalswabsoflayinghens．Thecompositionofbufferedpeptonewater(BPW )wasmodifiedin ordertodevelopaone—step6-hr—longculturingselectiveenrichmentmedium (SEM )，andaspecificprim— erhilAP3wasdesignedwithconsideration oftheinterferenceofavarietyofnon—Salmonellabacteriain hen’Sfeces．Theresultsshowedthat，aftercultivationfor6h，thegrowthoflowquantity(卜5CFU／50 mL)SalmonellainSEM reached10。CFU／mL，whichwerewellabovethetypicaldetectionlimitofPCR (1× 10 CFU／mL)．PrimerhilAP3wasprovedtobespecificforPCRamplificationofSalmonellafrom fecesoflayinghens．Byusingthis9-hr—longmethodthatinvolvesonestepselectiveculturing (6h)and aspecificprimerPCR assay，asfew as1_5CFU Salmonellaper5