吉林省公农1号紫花苜蓿高效根瘤菌株的筛选.pdfVIP

24 GRASSLAND AND TURF 2014 Vo1．34NO．6 吉林省 “公农 1号紫花苜蓿高效根瘤菌株的筛选 石茂玲 ，邓 波 ，刘 蒙 ，徐安凯 ，王志峰 ，周 可 ，周冀琼 1．中国农业大学 动物科技学院草地研究所 ，北京 100193；2．吉林省农业科学院 畜牧分院 草地研究所 ，吉林 长春 136100 摘要 ：在吉林省 4个生态类型地 区采集了74株不 同建植年限苜蓿的根瘤，调查 了“公农 1号”紫花 苜蓿根瘤菌株的分布情况。结果表明，苜蓿根瘤多数分布在根部 10cm 以下的须根 ；根瘤数量、重量受 苜蓿建植年限、不同生态类型及土壤类型的影响较大。分离纯化所得的 81株根瘤分离物经 “公农 1号” 苜蓿水培回接结瘤试验 ，得到 bc8，gz159和da80等 8个优 良根瘤菌株；在温室条件下，对回接试验筛选 出的8个菌株进行土壤盆栽复筛试验，以期筛选 出适合 “公农 1号”苜蓿生长的高效根瘤菌株。结果表 明，根瘤分布在植株根部 10～30cm处；在所有供试菌株 中，菌株 bc18、yj34、bc94和 gz159表现较为优 良。菌株 yj34和 bc94对茎长和叶片数影响最大，茎长分别增加 60．17 和 59．86 ，叶片数分别增加 97．92 和95．92 ；菌株 gz159对根长影响最大，根长增加 64．32 ；菌株gz159和 bc94对提 高植株干重 贡献最大，其中，菌株gz159比对照增产 288．24 ；供试菌株对根瘤数的影响也很显著 ，接种菌株 yj34的 苜蓿根瘤数相 比其他菌株较高，达 lO4．24 。综合分析 ，发现根瘤 菌株 gz159、bc94和 yj34较其他 菌株 表现突出，是吉林省 “公农 1号”苜蓿的高效根瘤菌株。 关键词 ：“公农 1号”紫花苜蓿 ；根瘤菌株 ；筛选 中图分类号 ：S541．9 文献标识码：A 文章编号：1009—5500 2014 06—0024—05 紫花苜蓿 Medicagosativa 为多年生豆科牧草， 4个生态类型地 区的紫花苜蓿根瘤菌资源进行调查， 是世界上种植广泛 的优质牧草，在我国已有 2000年 的 分离纯化不同生态类 型地 区的具有优 良性能的 “公农 栽培历史[，素有 “牧草之王”的美称 。 1号”苜蓿根瘤菌株 ，以期为该地 区菌剂研究提供科学 根瘤菌是一类广泛分布于土壤 中的革兰氏阴性细 依据。 菌l2]。根瘤菌能侵染豆科植物根部或茎部形成根瘤或 茎瘤 ，并在根瘤或茎瘤 中分化成类菌体 ，将空气 中的氮 1 材料和方法 素固定为植物可吸收利用 的氮 ]。根瘤菌与豆科植 1．1 根瘤菌资源调查 物形成的共生固氮体系具有非常显著的特点，要使苜 试验选取吉林省 4个不 同生态类型地 区，即西部 蓿获得最佳 固氮效果 ，需要根瘤 菌与寄主植物间的交 沙地草原区 白城市 、中部草甸草原区 大安市 、中部 互作用匹配很好[，而且根瘤菌一豆科植物共生关系 平原农 田区 公主岭市 、东部山地农 田区 延吉市 为 和地理环境存在密切关系 j。 调查样区。于 2011年 5月采样 ，详细记录样地周围环 吉林省是我国紫花苜蓿 的重要生产基地 ，试验以 境 ，土壤类型 ，植物生长状态 营养生长 、花期等 以及 栽培面积较大的 “公农 1号”紫花苜蓿为研究对象 ，对 根瘤形态。每个样 区选 3个采样点，每个采样点 3次 重复。采集按照边长为 30cm 的正方形挖掘植株 ，记 收稿 日期 ：2o14—0914；修 回日期 ：2o14一lO一13 录根瘤数 、有效根瘤数 粉红色或浅红色根瘤 、根瘤着 基金项 目：国家牧草产业技术体系 CARS一35 和 国家科技 生部位，量取根瘤大小，称量单个根瘤重及总根瘤重 。 支撑项 目 2012BAD13B07 资助 1．2 根瘤菌株的分离、纯化 作者简介 ：石茂玲 1989一 ，女 ，重庆人 ，硕士研究生 。 E—mail：smaoling516@ 163．corn 将根瘤用无菌水冲洗干净 ，0．1 的HgC1溶液浸 邓波为通讯作者 。 泡 5min，95 乙醇处理3O～60S，无菌水冲净 ，接种于 第 34卷 第 6期 草 原 与 草 坪 2014年 25 YMA斜面 ，挑取单菌落，革兰 氏染色镜检 ，直至得到 证根瘤的完整，用水仔细冲洗后计算单株根瘤数 。 纯菌落 。 3 单株干重 将植株在烘箱 中 12O℃杀青 4O 1．3 水培回接试验 min，70。C烘干 48h，称重 。 回接试验是确定根瘤分离物是否为根瘤 菌 的方 1．4．4 数据 处理 用 EXCEL2007软件 、SPSS17．0 法 ，在根部结瘤的可以初步确定为根瘤菌 ]。将 “公 统计软件进