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n胃癌蛋白质组学研究中双向凝胶电泳技术的优化.pdf
上 海 交 通 大 学 学 报 ( 医 学 版 )
( ) ·1603 ·
Vo l. 28 N o. 12 D ec. 2008 Journal of Shanghai J iaotong U n iversity M edical Science
文章编号 : 0258 - 5898 (2008) 12 - 1603 - 04 ·技术与方法 ·
胃癌蛋白质组学研究中双向凝胶电泳技术的优化
1 2 2 2 1 1 2
李 炜 , 李建芳 , 蔡 劬 , 瞿 颖 , 孔 雷 , 秦建民 , 刘炳亚
( 1. 上海中医药大学 普陀医院普外科 , 上海 200062; 2. 上海交通大学 医学院瑞金医院外科 上海消化外科研究所 , 上海
200025)
摘 要 : 目的 优化应用于胃癌蛋白质组学研究的双向凝胶电泳技术 。方法 利用双向凝胶电泳技术分离正常胃黏膜和 胃癌组
( )
织中的蛋白质 。比较不同蛋白提取方法 机械匀浆 + TCA 沉淀法 ,碾磨 +丙酮 / TCA 沉淀法 、不同最高聚焦电压 、不同样本上样
量以及不同 pH 值范围固相 pH 梯度胶条对双向凝胶电泳结果的影响 。结果 机械匀浆 + TCA 沉淀法得到的蛋白质点较多 ,但电
泳图谱中出现大量横纹 ,对电泳图后期分析的干扰相对严重 ;碾磨 +丙酮 / TCA 沉淀法则能达到最高聚焦电压 ,上样量少 ,使用
pH 58 固相 pH 梯度胶条获得可分辨的蛋白质点数最多且效果较好 。结论 对 胃癌组织 、正常胃黏膜组织的全蛋白抽提方法和
电泳条件进行了优化 。
关键词 : 胃癌 ; 双向电泳 ; 蛋白质组学
中图分类号 : Q 503; R 735. 2 文献标志码 : B
双向电泳 、生物质谱技术和生物信息学是蛋 白 脲 , PM SF ( Sigm a) ; Tris ba se, SD S ( Prom ega) ;甘氨酸 ,
[ 1 ] 硫代硫酸钠 , ED TA ,醋酸钠 。
质组学研究的三大支柱 。1975 年 , O ′Farrell 率先
利用双向凝胶 电泳技术进行蛋 白质混合物的分离 。 1. 1. 2 仪器和软件 : PROTEAN IEF Cell等电聚焦
在双向凝胶电泳中 , 蛋 白质首先根据等电点的不同 仪 , PRO TEAN P lu s M u ltiCa sting Chamber 制胶槽 ,
在一向等电聚焦电泳中分离 ,接着转移到二向 SD S - PROTEAN P lu s Dodeca Cell 电泳仪 , PRO TEAN Ⅱ xi
TM
聚丙烯酰胺凝胶上 ,根据相对分子质量大小被分离 。 V ertical E lectrop hore sis Cells 垂直 电泳仪 , F luorS
Bjellgvist等 [ 2 ] 发展并完善了固相 pH 梯度等电聚焦 M u ltim ager凝胶图像扫描仪 , PDQue st 7. 1. 1 2D 胶分
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