氯霉素全抗原的合成及鉴定_王雪.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2008 1 氯霉素全抗原的合成及鉴定 , 1 12 1 1 王雪 黄飚 金坚 屠蔷 1 2 江南大学医药学院,无锡 ;江苏省原子医学研究所,无锡 214122 214063 摘 要: 为建立氯霉素的免疫分析方法,采用混合酸酐法和重氮化法,将半抗原氯霉素 与载体牛血清白蛋 CAP 白 及卵清蛋白 偶联制备免疫抗原 和包被抗原 。以紫外扫描确定偶联率,并用酶联免疫 BSA OVA CAP-BSA CAP-OVA ELISA 的方法鉴定,确定偶联成功。经过比较,混合酸酐法优于重氮化法。 关键词: 氯霉素 免疫原 合成 混合酸酐法 重氮化法 SynthesisandIdentificationofChloramphenicolImmunogen , 1 12 1 1 WangXue HuangBiao JinJian TuQiang 1 2 , , ; , SchoolofMedicineJiangnanUniversityWuxi214122JiangsuInstituteofNuclearMedicineWuxi214063 : , Abstract InordortoestablishtheimmunoassaymethodofChloramphenicolCAP CAPwascoupledwith carrierproteinbovineserum albuminBSAandOvalbuminOVAtopreparecompleteantigenCAP-BSAandCAP-OVA bymixedanhydride MAreactionanddiazotizationreaction.Highperformanceliquidchromatography-Masssepectrum HPLC-MSwasusedtoidentifychloramphenicolsuccinate CAP-HS.UV andELISA wereusedtoidentifythe , antigen.ComparedwithdiazotizationreactionthemixedanhydrideMAreactionarebetter. Keywords: ChloramphenicolImmunogen SynthesisMixedanhydrideMA Diazotization 氯霉素 , 是对革兰氏阳性、阴性细菌均有抑制作用的广谱抗生素, 年首次从 chloramphenicolCAP 1947 链丝菌的培养液中提取而得到的抗生素。因CAP效高价廉,在医学和畜牧业中广为应用。但 CAP有毒害作 用 [1] ,最严重的是引起再生障碍性贫血和其他恶性血液病 。1994年,欧盟开始禁止 CAP在畜产品中的使用, 欧盟规定CAP残留不得检出。目前,欧盟、美国及日本等许多国家对 CAP的要求较以往更严格,目前允许 的最大残留量为 。 年 月 日中华人民共和国农业部发布了动物性食品中兽药最高残留限量 0.1ppb1999 9 13 的通知,规定了CAP在所有食品动物的可食用组织中不得检出。虽然各个国家对 CAP的残留作了严格规 定,但是CAP在畜产品的残留仍时有发生,这就要求建立一种高灵敏的检测方法。 测定食品中CAP含量的高效液相色谱分析方法和气相色谱等仪器分析方法、微生物法和比色法的样 品前处理及测定过程操作繁琐 [2~5] ,费用高,不适于大量样品筛查和在基层推广使用 。而免疫分析方法具有 灵敏度高、特异性强和样品前处理相对简单等优点,适于现场监控和大量样品筛查,也可以直接应用于生 [6] 产实践 。为了建立免疫分析方法,首先必须制备出效价高特异性强的抗体。CAP是小分子物质 分子量 323.13 ,本身不具有诱导产生抗体的能力。为此,必须设法先将小分子 CAP与载体蛋白质偶联制备成全抗 原,这是免疫分析的关键所在。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 购于上海生工, 为 公司产品, 购于上海西宝生物,超纯水由本室采用 公 CAP BSA sigma OVA Barnstead 收稿日期: 2007-05-08 基金项目:科技型中小企业技术创新基金 06c座机电话号码075 作者简介:王雪 ,女,在读硕士,从事氯霉素免疫分析方法研究; : 1983- E-mailsnowvonwang@ 通讯作者:金坚 , : , : 1960-Tel1座机电话号码19E-mailjinjian31@126.com 生物技术通报 年第 期 178 Biotechnology Bull