沙门菌志贺菌副溶血性弧菌多重PCR检测方法的研究.pdfVIP

OF MICROBIOLOGlMar．2009V01．29No．2 微生物学杂志 2009年3月第29卷第2期JOURNAL 101 沙门菌 、志贺菌、副溶血性弧茵多重PCR检测方法的研究 肖 勇1，吴家林1，凌 霞1， 张敬平1，倪陪华2，沙丹1 1．无锡市疾病预防控制中心．浙江无锡214023；2．匕海交通大学．上海200025 摘 要 建立快速检测沙门茵、志贺茵和副溶血性弧菌的多重PCR方法¨“J。根据沙门茵hilA基因、志贺茵 lp口H基因及副溶血性弧茵TDH基因设计特异性PCR引物”“1，被检样品经4h振荡培养后金属浴裂解制备 DNA模板，使用全自动毛细管电泳核酸检测系统分析PCR扩增产物。在580、423和245 bp处分别出现预期 的特异性DNA奈带，且无非特异扩增条带出现。敏感性试验显示沙门茵在模拟标本中的检测灵敏度为lO“2 cfu／mL、志贺茵为101efu／mL、副溶血性弧茵为102 cfo／mL。该方法操作方便、分析时间短、特异性和灵敏度高， 可用于公共卫生交发事件食源性病原茵的快速检测。 关键词 多重PCR；振荡培养；毛细管电泳；食品检验 中图分类号Q93—3l 文献标识码B 文章编号1005—7021 2009 02—0101—05 PCRDetectionMethodforSalmonella Multiple spp．， Vibrio Shigellaspp．，and parahaemolyticus XIAO Danl Yon91，WUJia．1inl，LINGXial，ZHANGJing．pin91，NIPei．hua2，SHA 1．Wuxi Pret≈nt．，Wuxi 200025 Municip．Cent．fo，D厶．Cont．and214023；2．ShanghaiJiaotongUniv．Shanghai AbstractIn toestablisha detectionmethod PCR order of forSalmonella rapid multiple spp．，Shigellaspp．，and V／br／o of PCR were to hilAinSalmonella parahaemolyticus，threepairsspecificprimersdesignedaccording genes in TDHinVibrio DNA ofthetested spp．，ipaHShigellaspp．，and parahaemolyticus．Thegenomictemplate samples were extractionwithmetalbathafter culturefor4 were prepared the by shaking hours，andPCR—amplifiedproducts then full—automatic resultsshowedthatthe DNA analyzedby capillaryelectrophoresis．The predictedspecificamplifi· cationbandsweredemonstratedat of580 245 non bands sequencesbp，423bp，andbp，and amplifiedap· unspecific on ofthis PCRwithstimulatedwere10“2efu／mlfromSalmonella peared．Assaysensitivitymultiple samples spp．， 10。efu／mLfrom 102efu／mLfromVibrio methodwas to Shigellaspp．，and parahaemolyticus．Therefore，thissimple 8hontimeto and will for beuseful detectionoffood-borne operate，take analyze，highspecificitysensitivity，and rapid in incidentof health． pathogensunexpected public Keywords PCR；shakingculture；capillaryelectrophoresis；food multiple inspection 由病原微生物引起的食源性疾病众多，且多 测定；定量PCR虽然能将检测时间缩短到2—3 事发突然。探索、研究快速的检测方法，一直是各 h，但是对多种病原菌同时检测的效果还不够理 级职能部门的工作内容。常规的病原微生物检测