第八章.微生物遗传变异及育种.ppt

基因突变的自发性和不对应性的证明 ◆另一种看法则认为，基因突变是自发的，且与环境是不相对称的。由于其中有自发突变、诱发突变、诱变剂与选择条件等多种因素错综在一起，所以难以探究问题的实质。 F因子及其在杂交中的行为 ②增殖培养（富集培养） ⅰ.适用： 样品中目的菌数量不够多时 ⅱ.目的： 提高样品中目的菌的数量和比例 ⅲ.原理： 通过控制营养成分或培养条件，使目的菌得以繁殖和/或非目的菌的生长受到抑制 ⅳ.方法： ③纯种分离 目的：将目的菌从混杂 的微生物中分离 出来，获得纯培 养 ⅲ.变色圈法 淀粉平板喷稀碘液：透明圈，液化型淀粉酶 支链淀粉平板喷稀碘液： 蓝色圈：异淀粉酶 无色圈：液化型淀粉酶 葡聚糖平板加刚果红：葡聚糖酶 木聚糖平板加刚果红：木聚糖酶 变色圈反应 ⅳ.生长圈法 工具菌： 营养缺酸型，不能合成的物质（生长因素）为目的菌积累的产物 菌落形态明显不同于目的菌 方法：106~107 工具菌与样品稀释液一起涂布至琼脂培养基表面，具有生长圈的菌落即为目的菌 适用：氨基酸，核苷酸，维生素产生菌的选育 ⅴ.抑制圈 适用：抗生素产生菌的选育 工具菌：对目的抗生素敏感的微生物 例：目的菌为产生抗G+细菌的抗生素的菌株 工具菌可使用金黄色葡萄球菌 方法 目的菌分离：稀释分离法，培养长出菌落 代谢物积累：用打孔器（6CM）将菌落连同周围琼脂培养基一起取下，放一无菌空培养皿内，保湿培养4-5天，使新产生抗生素积累于小琼脂块中 测定：取107工具菌涂布于琼脂培养基，将小琼脂块放于上面培养过夜，抑菌圈的出现，说明琼脂块中有抗生素，大小说明抗生素单位的高低 琼脂块培养法筛选抗生素产生菌程序 包含某种指示剂的固体培养基的滤纸片变色圈。 指示剂直接掺入或喷洒到固体培养基上，菌落周围形成变色圈。如淀粉的平皿上喷上稀碘液。 固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分,造成不透明的培养基背景。菌落利用此物质形成透明圈。 利用一些有特别营养要求的微生物作为工具菌,如待筛选菌具将有该营养物的前体转化成营养物 能力,工具菌就能围绕该菌生长. 待筛选的菌株能分泌产生某些能抑制工具菌生长的物质 ④厌氧性微生物的分离法 ⅰ.去除培养基中的溶解氧，降低Eh 煮沸法：将培养基置沸水中煮沸15分钟，驱除其中的溶解氧，勿再摇动，Eh可降至0.1V 以下 培养基预还原：将培养基中加入还原性物质：半胱氨酸，巯基化生物，Na2S，抗坏血酸等降低Eh ⅱ.创造无氧环境 物理除氧 空气置换法：干燥器或厌氧培养罐 抽真空 76mmHg→充入N2 （反复3次）→充入CO2 10% +H2 10% + N2 80% 化学除氧 H2 + O2 → H2O (钯作催化剂） GASPAK罐除氧：硼氢化钠、柠檬酸，碳酸氢钠化学反应产生H2 和CO2，H2与O2反应生成水 厌氧指示剂 ⅲ.厌氧分离（培养）技术 高层琼脂柱技术 厌氧罐技术 厌氧手套箱技术 GasPak ⑤ 筛选 —初筛：通风发酵菌种，通过摇瓶发酵进行，每 株一瓶 目的：淘汰80%-90%的分离菌株中的低产菌 培养条件：主要通过查阅资料及需要而预先决 定，如培养基组成，通风量（装液 量，摇瓶机转数），pH、温度、培 养时间等。 分析测定：最好定量，如较困难时可采取半定 量方法 —复筛：每株3-5瓶，可提前培养种子，使接种 量比较一致，3-5%接种量， 培养条件可同初筛 分析测定：定量，注意副产物 复筛可进行多次，逐步淘汰，留下3-5株甚至最好的1株 初筛和复筛的比较 ⑥培养工艺条件试验与生产试验 —摇瓶发酵条件 培养基组成，初始pH，通风量（装液量）， 接种量，培养温度… —小型台式发酵罐发酵工艺条件 溶解氧控制，pH值控制，原料添加模式，消 泡剂… 9.1.1 紫外线诱变 造成DNA链的断裂，或使DNA分子内或分子之间发生交联反应 机理 交联是由二聚体引起的，二聚体可以在同一条链相邻的碱基之间产生，也可以是在二条链的碱基之间形成。 物理诱变 紫外线 化学诱变 5-溴尿嘧啶 引起DNA复制错误 9.1 诱变育种 嘧啶比嘌呤对紫外线敏感得多 胸腺嘧啶二聚体 嘧啶的紫外线光化产物 ●胸腺嘧啶二聚体的修复 ①光复活作用 微生物等生物的细胞内存在光复活酶 光复活酶识别胸腺嘧啶二聚体，并与之结合形成复合物 打开二聚体,将DNA复原。 可见光光能(3