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双水相萃取技术 1.1 双水相系统 1.2 双水相中的分配平衡 1.3 影响物质分配平衡的因素 1. 4 双水相系统的应用 1.1 双水相系统 基因工程产品如蛋白质和酶往往是胞内产品，需经细胞破碎后才能提取、纯化，细胞颗粒尺寸的变化给固－液分离带来了困难，同时这类产品的活性和功能对pH值、温度和离子强度等环境因素特别敏感。由于它们在有机溶剂中的溶解度低并且会变性，因此传统的溶剂萃取法并不适合。采用在有机相中添加表面活性剂产生反胶束的办法可克服这些问题，但同样存在相的分离问题。 有机溶剂萃取的不足： 许多蛋白质都有极强的亲水性，不溶于有机溶剂; 蛋白质在有机溶剂相中易变性失活。 聚合物的不相溶性(incompatibility)：当两种高分子聚合物之间存在相互排斥作用时，由于相对分子质量较大，分子间的相互排斥作用与混合过程的熵增加相比占主导地位，一种聚合物分子的周围将聚集同种分子而排斥异种分子，当达到平衡时，即形成分别富含不同聚合物的两相。这种含有聚合物分子的溶液发生分相的现象称为聚合物的不相容性。 可形成双水相的双聚合物体系很多，如聚乙二醇(polyethylene glycol,略作PEG)/葡聚糖(dextran，略作Dx)，聚丙二醇(polypropylene glycol) / 聚乙二醇和甲基纤维素(methylcellulose)/葡聚糖等。双水相萃取中常采用的双聚合物系统为PEG/Dx，该双水相的上相富含PEG，下相富含Dx。除双聚合物系统外，聚合物与无机盐的混合溶液也可形成双水相。 双水相体系 在系线上各点处系统的总浓度不同，但均分成组成相同而体积不同的两相。两相的体积近似服从杠杆规则，即 1.2 双水相中的分配平衡 与溶剂萃取相同，溶质在双水相中的分配系数也用m=c2/c1表示。为简便起见，用c1 和c2分别表示平衡状态下下相和上相中溶质的总浓度。 生物分子的分配系数取决于溶质与双水相系统间的各种相互作用，其中主要有静电作用、疏水作用和生物亲和作用等。 1.2.2 疏水作用 PEG/Dx和PEG/无机盐等双水相系统的上相(PEG相)疏水性较大，相间的疏水性差用疏水性因子HF (hydrophoblc factor)表示。HF可通过测定疏水性已知的氨基酸在其等电点处的分配系数maa测算 如果在pH为等电点的双水相中蛋白质的分配系数(m0)与HF值之间呈线性关系，则直线的斜率定义为该蛋白质的表面疏水性，用HFS (hydrophobic factor of solutes)表示 3. 盐的种类和浓度 4. pH值 5. 温度 要成功地运用两水相萃取的方法，应 满足下列条件： 欲提取的酶和细胞应分配在不同的相中； 酶的分配系数应足够大，使在一定的相体积比时，经过一次萃取，就能得到高的收率； 两相用离心机很容易分离。 要进行两水相生物转化反应应满足下列条件： 催化剂应单侧分配； 底物应分配于催化剂所处的相中；产物应分配在另一相中；要有合适的相比。如产物分配在上相中，则相比要大，反之则相比要小。 采用两水相系统进行生物转化反应有下列优点： 与固定床反应器相比，不需载体，不存在多孔载体中的扩散阻力，故反应速度较快，生产能力较高； 生物催化剂在两水相系统中较稳定；两相间表面张力低，轻微搅拌即能形成高度分散系统，分散相液滴在10 ?m以下，有很大的表面积，有利于底物和产物的传递。 * * * * * Company LOGO * * 双水相萃取的优点: 使固液分离和纯化两个步骤同时进行，一步完成； 适合热敏物质的提取，主要是胞内酶； 亲水性聚合物加入水中，形成两相，在这两相中，水 分都占大比例（85～95％），这样生物活性蛋白质在两相中不会失活，且以一定比例分配于两相中。 磷酸钾、硫酸铵、硫酸钠 硫酸镁、酒石酸钾钠 聚乙二醇 P为聚合物 Q为盐类 羧甲基纤维素钠盐 羧甲基葡聚糖钠盐 P Q都为聚电解质 聚丙二醇、聚乙二醇 甲基纤维素 硫酸葡聚糖钠盐 羧甲基葡聚糖钠盐 P为带电荷聚电解质 聚乙烯醇 葡萄糖 (Dx) 聚乙烯吡咯烷酮 聚乙二醇（PEG） 聚乙二醇 聚乙烯醇 葡聚糖（Dx） 羟丙基葡萄糖 聚丙二醇 两种非离子型聚合物 物质Q的名称 物质P的名称 物质类型 a 双节线 系线 b 双节线 均相区 均相区 两相区 两相区 系线 临界点 图分别为PEG/葡萄糖(Dx)和PEG/磷酸钾(KPi)系统的典型相图 系线的长度是衡量两相间相对差别的尺度，系线越长，两相间的性质差别越大，反之则越小。当系线长