OsWAX2基因的植物表达载体构建及遗传转化.pdfVIP

维普资讯 第33卷第6期 湖南农业大学学报 (自然科学版) V0l1．33NO．6 2007年 12月 JournalofHunanAgriculturalUniversity(NaturalSciences) Dec．2Oo7 文章编号：1007．1032(2007)06-0639．07 OsWAX2基因的植物表达载体构建及遗传转化 向建华 “，高国赋 ，周小云 ’，刘爱玲 ’，邹 杰 ’，陈信波件 (1．湖南农业大学 作物基因工程湖南省重点实验室 ，湖南 长沙 410128；2-湖南科技大学 信息与电气工程 学院，湖南 湘潭 411211) 摘 要：利用拟南芥的WAX2基因序列，BLAST检索出3个水稻同源基因，分别命名为OsWAX2．J，OsWAX2．2， OsWAX2．3，与拟南芥 WAX2基因的同源性分别为 56．0％，55．2％，52．0％；其预测的编码蛋白与 WAX2蛋白的 同源性分别为61．5％，60．5％，64．7％．这3个蛋 白都存在4个跨膜结构和2个固醇去饱和酶的保守区，说明这 3个蛋白质都属于跨膜蛋白，并可能与角质层的蜡质合成有关．从全长cDNA数据库检索获得了3个 OsWAX2 的全长 cDNA．以pCAMBIA．1300．multi为载体 ，构建了CaMV35S启动子驱动的3个 OsWAX2的过表达载体 pOEOSW2．1，pOEOSW2-2，pOEOSW2．3及 3个 RNAi表达载体 pCROSW2．1，pCROSW2．2，pCROSW2．3， 并通过冻融法将 6个表达载体转化到根癌农杆菌EHA105，LBA4404和GV3101中，采用农杆菌介导法进行水 稻El本晴品种的遗传转化，得到了具有Hyg抗性的水稻转基因苗 ，PCR检测到阳性植株． 关 键 词：水稻；OsWAX2基因；过表达；RNAi；遗传转化 中图分类号：Q462．2；$511．034 文献标识码：A Expressionvectorconstructionandricetransform ationOsWAX2genes XIANGJian-hua ，GAOGuo-fu，ZHOUXiao-yun，LnJm-Ung ，ZOU Jie，CHENXin-bo ‘ (1．CropGeneEngineeringKeyLaboratoryofHunanProvince，HNAU，Changsha410128，China；2．Informationand ElectricalEngineeringInstitute，HunnaUniversityofSciencenadTechnology，Xinagtan ，Hunna411211，China) Abstract：ThreeOsWAX2genes，namedOsWAX2·J，OsWAX2—2，OsWAX2·3arefoundbyBLASTserachintheNCBI databaseusingtheArabidopsisWAX2genesequenceassubject．OsWAX2·J，OsWAX2·2，OsWAX2-3have56．0％， 55．2％ na d 52．0％ homology toArabidopsisWAX2 gene respectively．Homology oftheirpredicted proteinsto ArabidopsisWAX2proteinrae61．5％ ．60．5％ na d46 ．7％ respectively．Thereraefourtransmembrnaedomainsnad two conserved steroldesaturasesin thesethree proteins，suggesting htatOsWAX2 proteins are transmembrane proteinsnadcouldberelatedtop