p27kip1基因转移抑制大鼠胶质瘤生长的实验研究.pdfVIP

维普资讯 · 4410 · 现代预防版学2007年第34卷第 23期 ModernPreventiveMedicine，2007，Vo1．34，NO． 23 文章编号：1003—8507(2007)23—4410—03 中图分类号：R394．3 文献标识码：A 【论著】 p27kipl基因转移抑制大鼠胶质瘤生长的实验研究 赵斌杰 ，戢翰升 p27Kipl是 1994年发现的一种抑癌基因．P27蛋 白具有限 只购于湖北省实验动物 中心 ，8周龄 ，130～150g；鼠抗人 制性调节细胞周期进程 的作用。p27Kipl的表达下调或缺失与 p27kipl多抗 、鼠抗人 CvclinD1 抗均购 臼SantaCIL|Z公司 ； 胶质瘤的发生有密切关系。本研究用重组腺病毒介导的人突变 异硫 氰酸 荧光素 (FlumeseeiI1isothiocynate，FITC) 的羊抗 鼠 型p27kip1基因，观察对大鼠胶质瘤移植瘤生长 的影响，并探 IgG 抗 体 ．为 法 国 Ilnllltlllo[eeh公 司产 品 ：原 位 末 端 标 记 讨 了p27kip1的抑瘤机制 。 (rUNEL)法试剂盒购于北京中山公 司。 1．2 方法 l 材料与方法 1_2_1 细胞培养 、动物模 型的建立及基 因治疗 将 (：6胶质瘤 1．1 材料 细胞接种于含 1O％小牛血清 的 RPMI164O培养液中，2～3d传 携带人 p27Kipl基 因的重组复制缺陷性腺病毒 (Ad— 代 1次。将处于对数期生长的C6胶质瘤细胞消化脱壁 ，离心 p27Kip1)由郧阳医学院徐少勇教授惠赠 ；LacZ重组复制缺陷 洗涤 2次 ．调整细胞浓度 ，将细胞悬 浮于磷酸盐缓冲液 性腺病毒 (Ad—LacZ)由郧阳医学院王家宁博士构建 ；C6胶质 (PBS)中备用 。 瘤细胞购于武汉大学典型培养物保藏中心 ：含 1O％小牛血清的 颅 内肿瘤模 型 (3O只)：大 鼠麻酹后 ，将头部破毛剪除， RPM11640培养液购 自GIBCO公司；Wistar大 鼠 (雄性) 6O 固定于立体定向操作台上 纵向切开头皮并分离暴露颅骨 以 微型骨钻在颅骨冠状缝前 1IllN1、中线右旁开 3II1Ill钻一小孔 ， 作者简介 ：赵斌杰 (1969一)，男 ，硕士 ，副教授 ，研究方向：神经系 深5mm作注射点。以微量注射器注入 1O lC6胶质瘤细胞悬 统肿瘤研究 液 (约含 1．0xl06个细胞)至右侧纹状体 注身Ij时问5lllin，留 作者单位 ：湖北十堰市人 民医院，十堰 ，442000 维普资讯 现代预防医学 2007年第 34卷第23期 ModernPreventiveMedicine．2007，Vo1．34，NO．23 ·44ll · 针 5min后拔针。建立模型后 1周经 MRI证实有肿瘤形成 ，成 表 1 开始治疗后 1～4周各组肿瘤体积变化情况 (cm ) 瘤率 100％。取成瘤较均匀的 24只大 鼠随机分成