RNAi抑制肝星状细胞TIMP-1基因表达及对细胞生物学行为的影响.pdfVIP

维普资讯 第 11卷 第 4期 生命科 学研 究 VoI．11 No．4 20o7年 l2月 LifeScienceResearch Dec．2O07 RNAi抑制肝星状细胞 TIMP．1基因表达及对细胞 生物学行为的影响 徐华锋 ，一，邹海峰 ，林 平 ，刘 鑫 ，刘秀萍 ，于晓光 (1．哈尔滨医科大学 生物化学与分子生物学教研室，中国黑龙江 哈尔滨 150081； 2．黑龙江大学 生命科学院，中国黑龙江 哈尔滨 150080) 摘 要 ：研究了 siRNA对大鼠肝星状细胞(CFSC)TIMP-l基 因表达及对细胞生物学行为的影响．用 RT—PCR方 法获得带有 r7启动子的TIMP-l全基因序列，体外转录法获得 TIMP-ldsRNA，Dicer酶切后得到 siRNA．用质脂 体将 siRNA转染至 CFSC．RT—PCR检测 刀MP．1111RNA 的表达 ，MTT方法检测细胞生长 ，流式细胞仪检测细胞 凋亡．结果成功获得 TIMP-IsiRNA，将 TIMP-lsiRNA转染至 CFSC12、24、48h后 ，与对照相 比。TIMP-lmRNA 的表达逐渐下降．经 QuanityOne(BIO—RAD，USA)分析后 ，其抑制率分别为49，l8％、58．72％和 64．73％；siRNA 转染CFSC细胞后 。CFsC生长受到抑制。细胞凋亡不明显．实验结果表 明体外转录法得到的siRNA能有效地降 低大鼠CF’sC中TIMP-l的表达 ．明显抑制 CFSC的增殖 ，但不直接 引起 CF’sC的凋亡． 关键词 ：RNAi；基质金属蛋 白酶组织抑制因子一l；肝星状细胞 ；细胞凋亡 中图分类号：R34 文献标识码 ：A 文章编号：1007—7847{2007)04-0342—06 RNAiInhibittheExpressionofTIMP．1inCFSC and itsEffectonCeⅡBiologicalBehaviour XU Hua—feng．一，ZOU Hai—feng，LIN Ping，LIU Xin ， LIU Xiu—ping．YU Xiao—guang (1．DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，HrabinMedicalUniversay，Hrabin150081，Heilon~iang，China； 2，InstituteofL Science，Iteilon~iangUnciersity，Harbin150080，Heilon~iang，hCina) Abstract：TostudytheeffectofthesiRNA (smallinterferenceRNA)totheexpressionofTIMP-linCFSC (CCL4一cirrhoticfat—storingcells)andthecellbiologicalbehaviour，theTIMP-1genesequencewithT7 promoter was obtained by RT-PCR．The 刀 P-1 dsRNA was obtained by the method of in vitro transcription．ThesiRNA wasobtainedbyDicer． Th e siRNA wastransfeeted toCFSC byliposome，and theexpressionofTIMP-1wasanalyzedbyRT—PCR．Cellgrowthwasshownbymethylthiazolium tetrazolium (M1rr)．TheapoptosisofCFSCwasdetectedbyFlow Cytometry