RNA干扰c-kit对K562细胞成瘤性的影响.pdfVIP

维普资讯 天津医药2007年 12月第35卷第 12期 921 RNA干扰 c—kit对 K562细胞成瘤性的影响 袁文肃 李 克 马 丽 芦 颖 李庆华 李 静 马小彤 庞天翔 摘要 目的：研究短干扰 RNA(siRNA)对 K562细胞 中c—kit基因表达的影响。方法 ：构建针对 c—kit基因的 shRNA表达质粒 pSilencer—kit，在脂质体介导下转染人白血病细胞系K562，应用 RT—PCR检测c—kitmRNA水平变 化，并将转染后的K562细胞注射裸小鼠体内检测成瘤能力的变化。结果：重组体pSilencer-kit转染细胞后显著下调 c—kitmRNA水平及其在裸鼠体内成瘤能力，与对照组相比差异有统计学意义(P0．01)。结论 ：利用RNA干扰技术 能有效抑制靶基因c—kit的表达，为肿瘤的基因治疗提供新思路。 关键词 RNA，小分子干扰 K562细胞 原癌基因蛋白质c—kit 基因表达 转染 逆转录聚合酶链反应 EffectofsiRNAonExpressionofC—k．1inK562Cells YUANWensu，LIKe，MALi，LUYing，LIQinghua，LIJing，MAXiaotong，PANGTianxiang BloodDiseaseHospita]．CAMsandPUMC。Tianjin300o2o。China Abstract0bjective：TostudytheeffectofshortinterferenceRNA (siRNA)onhteexpressionofc—kitinK562cells． Methods：PlasmidpSilencer—kitexpressingC—kitsiRNA wasconstructed．TherecombinantplasmidWas transfectedinto K562cellsbylipofectamine．Iecellularc—kitexpressionwasdetectedbyRT—PCR．Toanalyzehtetumorigenicability．hte tulnorsizeinnuderats，whichhadbeeninjectedwithK562andtrnasfectedK562cells，Wasmeasured．Results：Th elevel ofc-kitmRNA couldbesignificna tlyreducedbysiRNA．Whentrna sfectedwiht pSilencer-kit．hteexpressionsofc-kit mRNAwere significnaflyinhibitedcomparedwiththatincontro1．Conclusion：Thevectorwhichexpressc-kitsiRNAwas successfullyconstructed． eRNA interferenceCalleffectivelyinhibithteexpressionoftargetgeneC—kit．andCna be potentiallyusefulingenehterapyofC—kitrelatedcancers． Keywords RNA．smallinterfering K562cells proto-oncogeneproteinC-kit geneexpression trnasfection reve~ transcriptasepolymerasechainreaction c—Ii}是HTA猫科肉瘤病毒 kit癌基因的同源 1．2 方法 物，位于人染色体4q12～13[1，是白色斑点显性基因 1．2．1 目标基因序列的选择及载体构建 在Genbnak上查 的等位基因。其受体又称 CD117，在绝大多数的肿 找人c—kit基因序列 ，根据 siRNA设计原则口】，从基因编码区