亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C→T突变和男性不育相关性研究.pdfVIP

亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C_T突变 与男性不育相关性研究 杨本海孔丽娜彭守静皮静萍彭弋峰 皖南医学院附属弋矶山医院 亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate 叶酸还原为5．甲基四氢叶酸，5．甲基四氢叶酸为同型半胱氨酸提供甲基基团(-CH3)使其转变为 甲硫氨酸(蛋氨酸)，甲硫氨酸与ATP作用生成活性的孓腺苷甲硫氨酸，5．腺苷甲硫氨酸在甲基转 移酶的作用下，将甲基基团转移给胞嘧啶、赖氨酸残基等参加DNA、RNA、组蛋白和核酸等的生 70％(TT基因型)，同时使血中的同型半胱氨酸水平升高，出现同型半胱氨酸血症和同型半胱氨 酸尿症。MTHFR基因677C--，T突变后酶活性的下降与多种疾病有关，如血管疾病，神经管缺陷【， 性研究，在不同的人群中得出的结论前后不一致11．51，为了解中国皖南地区汉族人群中MTHFR基 因677C，T突变与男性不育的关系，本文选择临床上常见的少、弱精症作为研究对象，研究MTHFR 基因677C和677T等位基因频率。 1．材料和方法 1．1材料259例患者均来自我院生殖医学研究所性医学科门诊，居住在皖南地区，汉族，年龄25．46 例：①由于性腺功能异常引起的促性腺激素分泌不足或滥用雄激素：②药物的过度治疗；③睾丸体 积小于6ml。293例正常对照来自我院健康体检中心， 居住在皖南地区，汉族，年龄27．49岁，平均年龄33岁，具有正常生育能力的男性，无不育相关 治疗史，均育有1个或以上子女。 1．2方法 1．2．1基因组DNA提取：参考文献16I，采用Chelex-100法提取，．20保存待用。 GGGAGC-rrTGAG 1．2．2 GCA PCR扩增：引物参考文献17l，5GAA GTGCATGCC 司Tc．480型。所有试剂均为上海生工生物工程技术服务有限公司产品。 1．2．3 10xBuffer2pl，在BS2型电热三用水浴箱中65C过夜。 1．2．4基因型检测：参考文献|8-91，采用3．0％琼脂糖电泳，EB染色，．用Bio—RADGELDocl000凝 胶成像系统观察结果确定基因型并照相保存。 1．2．5统计学处理：基因型频率和等位基因频率采用绉检验。 2．结果 2．1检测结果：本文应用一对引物成功地从基因组中扩增出长度为134bp目的靶片段，PCR产物 224 经1．5％琼脂糖电泳检测特异性好，产物经TaqI酶切后可产生三种不同的酶切结果，不能被酶切， 图1 显著高于对照组(Z2=24．17，PO．01)；患者TT基因型频率高于对照组(X2=22．52P0．01)。病 例和对照组等位基因频率及基因型频率见表1、表2。 表1亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C,T突变等位基因频率 表2亚甲基四氢叶酸还原酶基因677C—T突变基因型频率 3．讨论 已有的研究发现该基因有多种突变，其中最有临床意义的突变是该基因677C,T的突变，使丙氨 酸变成缬氨酸，同时产生一个Hinf和TaqI限制性酶切位点，因此在人群中产生三种不同基因型： 的结论前后相反，Bezold等IlI在研究德国人群时发现，TT基因型的频率为18．8％，在正常对照中 TT基因型频率9．5％，因此MTHFR基因677C—T突变是该国男性不育的一个遗传风险因子；而 L等【3J在研究意大利人群时却发现，TT基因型的频率为20．4％，在正常对照中TT基因型 Stuppia 的频率为27．6％，MTHFR基因677C_T突变不是该国男性不育的遗传风险因子。因此阐明 MTHFR基因677C--,T突变与中国皖南地区男性不育的相关性，为治疗该类患者提供有效的理论 依据，显得尤为必要。 我们选择临床上常见的少、弱精子症作为研究对象发现，正常对照的T等位基因频率为 0．01)，提示T等位基因与中国皖南地区汉族男性不育之间存在关联性。同时正常对照TT基因 型的频率为18．09％，而患者的TT基因型频率为35．52％，显著高于正常对照，差异有统计学意义 225 皖南地区汉族男性不育的■个风险因子，但CT基因型却不是该地区男性不育的一个遗传