分子标记技术在家蚕遗传育种中应用.pdfVIP

国蚕学会第七届青年学术研讨会论文集 分子标记技术在家蚕遗传育种中的应用 吴 凡 陈登松 范 李德臣 （湖北省农业科学院经济作物研究所，湖北武汉 430064 ） 摘 要 介绍了在家蚕分子标记 运用较多的几种分子标记技术，概括了分子标记技术在家 蚕遗传育种中的应用情况，并分析了分子标记技术在家蚕遗传育种上的应用前景。 关键词 分子标记；家蚕；遗传育种；应用 分子标记是遗传育种的重要工具，对分子标记在杂交后代的分离类型进行分析，是了解这些标 记以它们紧密连锁的其它基因所控制性状的遗传性的主要途径。家蚕遗传标记的发展经历了漫长的 [1] 历史过程，至今已出现了形态标记、生化标记、细胞学标记、分子标记4类具有代表性的遗传标记 。 分子标记具有以下优点：可对各个发育时期的个体、各个组织甚至细胞作检测；可随时检测，不受 取材部位、时间、发育时期和环境的影响；数量极多，遍布整个基因组；取材少，多态性好且许多 [2] 标记为共显性，信息完整的特点 。现将常用的分子标记技术及分子标记技术在家蚕遗传育种中的 应用情况综述如下。 1 常用的分子标记技术 目前，所采用的分子标记主要分为2类：一类是以DNA 印迹杂交 （Southern Blot Hybridization ） 技术为核心的分子标记，如限制性片段长度多态性 （Restriction Fragment Length Polymorphism，简 称RFLP ）；另一类是以聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，简称PCR)为核心的分子标记， 如扩增片段长度多态性 （Amplified Fragment Length Polymorphism，简称AFLP ）、随机扩增多态性 DNA （Random Amplified Polymorphic DNA，简称RAPD ）、微卫星DNA也称为简单重复序列(Simple Sequence Repeat ，简称SSR) 、简单序列重复区间扩增多态性(Inter Simple Sequence Repeats ，简称 ISSR) 、单核苷酸多态性 （single Nucleotide Polymorphism，简称SNP ）等。在家蚕分子标记 运用较 多的有以下几种方法。 1.1 限制性片段长度多态性 限制性片段长度多态性 （RFLP ）是最早发展起来的分子标记技术，由于进化过程 染色体DNA 上核苷酸序列发生了某种改变，当这种改变涉及到限制性酶切位点时，酶切后产生的DNA片段在不 同个体之间呈多态现象，通过电泳将DNA片段分开，再用DNA探针进行Southern杂交，检测DNA片 [3] 段长度差异的多态性 。RFLP标记是共显性的，遗传稳定，符合孟德尔遗传方式；但其对DNA 的需 要量较大(5～10 µg) ，技术过程较复杂，并且需要使用放射性同位素，不能大规模地进行遗传多样性 分析，因而不能直接用于育种。 1.2 随机扩增多态性DNA 随机扩增多态性DNA （RAPD ）以基因组DNA为模板，用随机的短脱氧核苷酸片段(一般9～10 bp) 作为引物对基因组DNA进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳和染色来确定DNA 中的核苷酸顺序，检测 作者简介：吴凡 （1980－），女，山东汶上，硕士研究生，助理研究员。 Tel：027E-mail：wufan996@163.com 523 国蚕学会第七届青年学术研讨会论文集 [4] DNA序列的多态性 。RAPD技术是共显性的，符合孟德尔简单遗传方式，虽然不能提供完整的遗传 信息，其扩增产物的稳定性差，但因其简单易行，需要的DNA量极少，无需使用放射性同位素，对 实验设备的要求低且周期短，因而受到研究者的普遍欢迎，被广泛地应用。RAPD是目前在家蚕中进 行标记和定位运用最多的一种方法。 1.3 扩增