碱性品红在病理特殊染色中应用.pdfVIP

2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 基因的突变。通过全淋巴结组织DNA溶胶K—ras癌基因测序，辅助检测临床微转移现象。鉴定心脑 血管疾病APOE基因多态性6种基因表型，94高危类型与高脂血症、冠心病、脑血管病和老年性痴 呆有关。对癌症家族有血缘关系的亲属检测相关癌基因突变或多态性，具有亚健康诊断和体检意义。 碱性品红在病理特殊染色中的应用 梁英杰(中山大学附属第一医院病理科 中山大学中山医学院病理教研室) 碱性品红是常用的生物染料，可以对多种组织细胞成份进行特异性染色，在组织学特殊染色中广 泛应用。 碱性品红(Fuchsinbasic)又称盐基品红、碱性新品红，是品红和副品红的盐酸盐或乙酸盐的混合 物。呈墨绿色金属光泽的结晶，溶于乙醇(溶解度8％)、戊醇和微溶于水(溶解度1％)，不溶于 乙醚。在乙醇中最大吸收波长为543nm，吸收系数e93000，200℃以上分解，有毒。 分子结构为： 一种试剂要成为染料并具有染色力，其分子结构必须具有能使染料产生颜色的发色团以及能使染料 与被染物分子间产生亲和力的助色团。碱性品红的发色团为对醌型( 滁 )，助色团是氨基 H (一N2)。吣沁 在特殊染色中，所用的染料要求有较高的特异性，能特异地显示所需要观察的物质。与常规的HE 染色不同，特殊染色中的每种染色都需要某种特殊的染料或试剂，需要一定的染色预处理、染色时间 和pH环境，进行不同的染色操作步骤。所用染料要使染色对所显示的物质具有一定的专属性，但这 种专属性并不唯一。用不同的染色方法进行不同的染色，往往需要配制不同的染料和试剂。同一种染 色液因用不同的染色时间和不同的染色前处理可以显示不同的物质，但特殊染色在组织或细胞内所产生 的反应产物必须具有一定的颜色，颜色越鲜艳越深就越好。 碱性品红可以按照不同的配方配成不同的染色液，用于显示组织细胞中的多种物质成份。 一、无色品红(Schiff氏试剂) 1、试剂配制 碱性品红 lg 蒸馏水 200ml lmo儿盐酸 20越 偏重皿硫酸钠l～1．59 活性碳 1～1．59 蒸馏水加热至沸腾溶解碱性品红。 6 2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 2、染色前处理 (1)高碘酸氧化 (2)铬酸氧化 (3)酸水解 3、染色 可分别显示糖原、中性黏液物质、霉菌、基底膜、脂褐素、垂体嗜碱细胞和脱氧核糖核酸等。 4、PAS染色质控： ．无色品红中碱性品红浓度为0．5％ ·碱性品红在水溶解度1％ ．蒸馏水加热至沸腾溶解碱性品红 ·偏重亚硫酸钠纯度要高 ．低温保存 ． 避光保存、染色 ．染色避免加温 ．染色后不要直接水洗 ·DNA染色的组织固定可用大多数的常用固定剂，但用Bouin固定的组织，会引起过度水解， 故不宜采用。 ． 60℃的1N盐酸水解过程中容易脱片，应加以注意。 ． 水解时间不足或过长都会影响染色效果。 二、醛品红 l、试剂配制 碱性品红0．59 70％乙醇 100IIll 浓盐酸lml 三聚乙醛lml 2、染色前处理 (1)Lugol氏碘氧化一硫代硫酸钠漂白 (2)高锰酸钾氧化一草酸漂白 (3)酸化高锰酸钾氧化一草酸漂白 (4)不需要 3、染色 可分别显示弹力纤维、乙型肝炎表面抗原、脂褐素、肥大细胞、某些黏液物质和胰岛B细胞等。 显示这些不同的物质用同一种染色液需要不同的染色时间和不同的染色前处理。 7 2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 4、醛品红染色质控： ．陈旧的醛品红染液可出现共染现象(非特异性背景染色) ·染色前后需用70％乙醇稍洗 ．霉菌的无色品红一醛品红双重染色主要起加强染色作用 三、苯酚碱性品红 l、试剂配制 (1)碱性品红酒精液 碱性品红 跆m 无水酒精 0 (2)5％苯酚水溶液