结核分枝杆菌MPT83表达、免疫特性分析及其在牛结核病检测中应用.pdfVIP

第四届中国兽药大会——兽医微生物学、兽医生物制品学学术论坛论文集(2012年) 结核分枝杆菌MPT83的表达、免疫特性分析及其在牛结核病检测中的应用 孟闯，陈祥，时振华，徐正中，文志发，潘志明，焦新安 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室，扬州225009 摘要：目的原核表达并纯化结核分枝杆菌MPT83蛋白，并分析其细胞免疫学特性，同时建立间接ELISA方法用于牛结 细胞免疫学特性，建立间接ELISA方法，检测临床采集的奶牛血样，评价其用于牛结核病血清学检测的能力。结果SDS 学临床检检测。 关键词：牛结核病；MPT83蛋白；原核表达；细胞免疫学；血清学检测 牛结核病(Bovinetuberculosis)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium 引起的一种人兽共患慢性传染性疾病，被国际动物卫生组织(OIE)列为需通报的动物疫病u屯。。M．boviS 宿主范围广泛，可感染50多种哺乳动物及20余种禽类，极大增加了全球防控牛结核病的难度，以至无一 国家获OIE“无结核”认可∞1。通过接触病牛或饮用污染奶制品可致人患病，使该病成为严重危害公共健康 的人兽共患病风险。因此如何有效预防和检测牛结核病具有重要经济和社会意义。 (Mycobacterium 疫原性和免疫保护性H’5|。本研究在表达纯化MPT83蛋白并对其细胞免疫特性初步分析的基础上，成功建立 以其作为包被抗原的用于牛结核病临床检测的间接ELISA方法，为该病的血清学诊断提供新材料。 1材料与方法 1．1 vector购自宝生物工程(大连)有限公司：表达 菌种、试剂、仪器和实验动物克隆载体pMDl8一Z Q、BL21(DE3)由本室保存。分子生物学构建相关 质粒pET30a(+)购自Novagen公司；大肠埃希菌DH5 Bind 酶购自宝生物工程(大连)有限公司；HiSpurification Biotech公司产品；RPMI1640和胎牛血清购自GBICO公 自Invitrogen公司，HRP一羊抗牛IgG为Southern bovdsGammaInterferonTestKitfor MiLLipore公司；BOVIGAM“JIycobacterium 5000一V B购 自Bio—RAD公司。SPF级雌性C57BL／6小鼠，6—8周龄，购自扬州大学比较医学中心。 1．2 上游引物为：5’一GGATCCTGTTCGAGCACc从ACCC一3’(引入BamHI酶切位点)；下游引物为： 5’一AAGCTTGCGCCGAACGTTACTGT一3’(引入Hind (DE3)。连接、转化、碱裂解法提取质粒等操作均参照文献进行哺。。 基金项目：国家公益性行业科研专项(200903027)，国家科技重大专项(2008ZXl0003—010) 作者简介：孟闯(1985一)，博士研究生，主要从事结核病原免疫学方面研究，E-mail：mengchuan91985@yah00．cn }通讯作者：焦新安 ·--——200·--—— 细菌 1 3 4 06， 加IPTG(O Bind cation 7 purifi kit纯化，其体步骤依说叫¨进行。将纯化洗脱液十尤菌PBS(pH