HPLC-MS%2fMS法测定人血浆中盐酸戊乙奎醚和其人体药动学应用.pdfVIP

HPLO-MS／MS法测定人血浆中盐酸戊乙奎醚及其人体药动学应用 余勤，梁茂植，张丽娟，南峰，秦永平， 四川大学华西GCP中,blt备床药理研究室 盐酸戊乙奎醚(Penehyclidine 要对中枢神经有较强的抗M、N样作用，对外周神经有较强的抗M作用和一定程度的抗 N样作用。故对有机磷中毒解毒、平滑肌的痉挛性收缩引起的支气管哮喘，慢性支气管 肺炎等有效。由于戊乙奎醚对心血管系统没有影响，不致引起心率和血压的变化，因 此较肾上腺素能B受体兴奋剂有一定的优越性n：。目前已报道的戊乙奎醚药动学研究 测定方法有GC／MS／MS和用放射受体和放射性同位素方法∞33’本法建立了高效液相色谱 一质谱法测定人血浆中戊乙奎醚浓度的方法，其结果准确，操作简单，重现性好。可 用于临床血药浓度的检测和药动学的研究。 一、仪器和试药 样器)与美国ABI公司API3000三重四级杆串连质谱仪。Analyst色谱：l：作站。 实验用甲醇、甲酸、石油醚、甲醚为HPLC级，醋酸胺等其它化学试剂均为分析纯。 吱验中所用去离子水为MILLIPORE公司RiOs删-16仪制备的I类水。 盐酸戊乙奎醚化学对照品由成都力思特制药股份有限公司提供(批号060501，纯 所标定化学对照品(批号10233—0102)。 二、测定方法 1色谱和质谱条件 um)色谱柱，流动相cH。OH： 1．1色谱条件：色谱柱为GeminiC．。(50×2．1mm，5 1，柱温：室温 (19℃)。 1．2质谱条件：离子源为ESI，采片j选择性离子监测模式同时测定戊乙奎醚(316．20／ 128．30 m／z)。 m／z)，内标维拉帕米(454．6／303．4 2对照品和内标储备液配制 精密称取盐酸戊乙奎醚对照品1．1mg(相当于戊乙奎醚1．Omg)，用50％甲醇定容 u 于10mL容量瓶中，混匀即成戊乙奎醚贮备液(100g·mL1)。取戊乙李醚储备液250 p ll 1)。冉取Iml戊乙奎醚 L定溶于25mL容量瓶中，即得戊乙奎醚工作液I(1g·mL 工作液I，用50％甲醇定容于50mL容量瓶中，即得戊乙奎醚工作液IT(20ng·mLq)， 置2—8C冰箱保存。精密称取盐酸维拉帕米5．4rag(相当于维拉帕米5．0rag)，用50％ 212 u 甲醇定溶于50mL容量瓶，即得内标标准储备液(100g·mL。)。取内标标准储备液 0．1mL，川50％甲醇定溶于100 mL容量瓶，混匀得内标工作液1(100ng·mLl)。再 取内标工作液IlOmL．用50％甲醇定溶’』’100mL容量瓶i混匀得内标工作液1I(10 ng·mL。)。置2—8。C冰箱储存器用。 3血浆样品处理 取血浆样品0．2mL，加入0．1mL内标工作液，漩涡混匀，加入0lmLNaOn液，漩 涡混匀后加入3mL石油醚：乙醚萃取液，漩涡萃取6min，离心7min，转移上层有机相 于另一失底试管：卜麟液再加入3wL石油醚：乙醚萃取液，漩涡萃取6min，离心7min (3000rpm)，转移上层有机相于前述尖底试管合并，置30℃水浴中通空气流挥干。残 u 留物溶于80uL流动相，漩涡混匀lmin，分装入全自动进样器，进样50L。记录戊 乙奎醚和内标离子流质谱圈的质谱峰面积，求算戊乙奎醚和内标的峰面积比，并从相 应标准曲线上求算样品中戊乙奎醚浓度。 4标准曲线和线性范围 取空白m浆0．1mL共9份，加入0．1mL戊乙奎醚标准系列．】：作液，配成备含lo、 ?5、5、2．5、125、0．625、0．3125、0．15625、0．078125ng·mL1的血浆