寡核苷酸药物和其大规模制备技术研究进展.pdfVIP

寡核苷酸药物及其大规模制备技术研究进展木 汪小龙，陈刚 中国海洋大学生命学院生物工程系 中国山东青岛鱼山路5号，266003 ：I=本研究由国家自然科学基金项目“聚合酶一内切酶扩增反应制备反义寡核苷酸” 摘要：寡核苷酸是生物医学和生命科学领域研究的一种基本工具，并被开发为基因靶向治疗 药物。近期寡核苷酸药物研究取得了一些重大突破，寡核苷酸药物前景十分广阔。反义寡核 苷酸已经被开发为基因靶向治疗的药物，用于抗病毒、抗肿瘤和治疗遗传性疾病。CpG寡核 苷酸则能够激活非特异性免疫反应，可用作免疫增强剂和疫苗佐剂。目前，寡核苷酸主要采 用化学方法合成，但化学合成寡核苷酸产物纯度低，而纯化十分困难。大规模合成寡核苷酸 的成本十分高昂，大大限制了寡核苷酸药物的研究和应用。由于天然的寡核苷酸在体内很容 易降解，而且具有一些毒副作用，因此作为药物的寡核苷酸必须在磷酸二酯键中带有硫代修 饰基团，增强寡核苷酸在体内的稳定性。目前国际上已经出现了一些核酸扩增方法，但能够 用于扩增寡核苷酸的方法极少，并且这些方法目前尚不能产生带有硫代修饰的寡核苷酸。我 们首创了一种新的基于热循环的寡核苷酸扩增方法，称为“聚合酶一内切酶扩增反应” (Polymerase—endonucleasereaction，PEAR)，该方法采用酶催化法，使 amplification 寡核苷酸等小分子核酸能够像病毒一样自我复制，大大提高寡核苷酸产品的纯度。这种新的 寡核苷酸生产方法具有很多优点，能解决目前寡核苷酸制造中的诸多问题。PEAR产物无需 经过任何处理，无需加入新的引物和模板，直接作为‘种子’进行二次扩增。与化学合成法 相比，该技术不需要昂贵的生产设备，大大降低了生产成本，而且工艺很容易放大，用于大 规模生产修饰寡核苷酸。目前该方法已成功制备硫代修饰寡核苷酸分子，可用于生产高纯度 的寡核苷酸类基因药物，将有助于推动寡核苷酸药物的发展。 TherecentdeveI i n studi esand opments technoI i esfor I ar I e rati onof og ge—scaprepa 0I i I eoti dedr gonuc ugs Chen XiaolongWang，Gang of of DepartmentBiotechnology，OceanUniversity P．R．China Abstract：Therecent in studieshavemadesome developmentsoligonucleotidedrug and hasa majorbreakthroughs，oligonucleotidedrug verypromisingprospects． 3 for Antisense havebeen as therapeutics oligonucleotidesdevelopedtargetedgene andtreatmentof anti-viral，anti—tumorhereditarydiseases．CpGoligonuc