调中颗粒对胃肌间Cajal间质细胞功能和数量影响的实验研究.pdfVIP

调中颗粒对胃肌间Cajal间质细胞功能 及数量影响的实验研究 时昭红1 韦秀明2王湘宁2林丽莉2 1湖北省武汉市中西医结合医院 湖北武汉(430022) 2湖北中医学院湖北武汉(430061) 中医药在功能性消化不良(Functional dys—pepsia，FD)治疗方面均取得了较好的疗效。调中颗 粒是根据中医经典名方半夏泻心汤为基础方加减而来，具有“辛开苦降以条畅气机，甘温调补以和 脾胃、补中气”的机制。该研究通过动物实验，从胃动力(胃电图)、ICC的超微结构以及ICC的分 布和含量变化的角度研究此方治疗FD的作用机制。 1-材料和方法 1．1材料 1．1．1实验动物 健康SD雄性大鼠，40只，体重200±209。由华中科技大学同济医学院动物研究所提供(合格 心汤组和调中颗粒组，每组8只，分笼饲养于钢丝网底塑料笼内。 1．1．2实验药物和制备： ①调中颗粒(姜半夏、大枣、杏仁、厚朴、黄连、甘草、黄芩、炮姜、太子参，由武汉市中西 度为0．259／rra的溶液。②半夏泻心汤(半夏129、黄芩、干姜、党参、炙甘草各99，黄连39，大枣 4枚，制备成浓度为1．359／ml的汤剂)由武汉市中西医结合医院制剂室提供。③多潘立酮(西安杨 的溶液)。 1．1．3主要试剂及仪器 酪氨酸激酶受体抗体c．1【it购自武汉博士德公司。SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德公司。 G12 限公司提供)。奥林巴斯BX一60型光镜。荷兰FEITecnai12透射电镜。 1．2方法 1．2．1模型的建立 按郭海军夹尾造模法，将同笼老鼠用长海绵钳夹大鼠尾巴远端三分之一处，以不破皮为度，令 其暴怒，寻衅与其他大鼠撕打，以激怒全笼大鼠。每次刺激30min，半小时内连续不断地刺激，随 着打斗的加剧，大鼠可能被抓伤，为避免炎症干扰，可用O．5％的碘伏涂擦受伤部位，以控制感染， 每日2次，连续刺激12天，制备功能性消化不良模型。从造模结束5d后，各组按lml／1009给予调 型组给予同体积的生理盐水，每d2次，连续给药12d。 1．2．2胃电参数分析 用苦昧酸给每只大鼠作标志，以便同一只大鼠治疗前后对照。做胃电图前禁食10h，腹腔注射 戊巴比妥钠麻醉(40mg／kg)，仰卧固定于鼠台上，在剑突下、胃大弯、胃小弯和幽门体表投影处相 ．．一292．，一 应皮下用胶布固定4个Ag／AgCl电极(人用电极改进)，固定前用导电膏涂于电极下，在确认电极接 触良好的情况下，采用美国美敦力公司生产POLYGRAMNE刑胃电图系统(由维迪电子有限公司 个时间段，记录胃机械运动的主频率、主功率，统计分析胃电参数确定造模是否成功。 1．213电镜检查 胃电图检查结束，大鼠禁食24h后，将大鼠颈椎脱臼处死，剖开腹腔，快速取出胃底、胃窦和 固定液进行固定预固定2h，使细胞内的微细结构尽量保存在生活状态下的位置和形态；0．1mol／L磷 酸缓冲液漂洗过夜，中间更换5次缓冲液；1％四氧化锇固定液后固定2h左右；0．1mol／L磷酸缓冲 一次，每次10min100％丙酮2次，每次10～15min。脱水时间可根据组织的种类和大小适量增减； 即可。电镜下观察。 1．2．4免疫组化 与灌胃结束后，将各组大鼠禁食10h，颈椎脱臼处死。剖腹立即在胃底及胃窦部各取胃壁全层 后，反复1．2次。冷却后0．1MPBS洗涤2次；滴加正常山羊血清封闭液一滴，室温20min。甩出 分钟。0．1mol／L 黄色。 1．2．5统计学方法 检验资料结果以x签表示，数据均采用SPSS 13．0统计软件进行单因素方差分析，组间比较用q 检验。 2．结果 2．1胃电参数分析 对FD大鼠主频率、主功率的影响(i蛰) 与正常对照组比较，▲P0．05，。P0．05 本实验根据郭海军加为造模方法，通过夹尾刺激造成大鼠精神紧张，使大鼠出现胃电失常，实 验结果显示：模型组主频率、主功率明显不同于正常组，经统计处理，P0．05，有显著差异，说明 实验成功制备了大鼠胃电节律失常模型。