病原生物学实验1.pptVIP

2004年4月，中国疾病预防控制中心科研人员，采用未经论证的非典病毒灭活方法，在不符合防护要求的普通实验室内操作非典感染材料，造成北京、安徽发生非典疫情。 2010年12月，东北农业大学28名师生在“羊活体解剖学实验课”中感染布鲁氏菌病。2011年6月，东北农业大学免去该校动物医学院院长和党支书职务。感染病菌的学生称，羊没有被检疫，被染病的羊那天被几个班级的学生重复使用。 通透性学说 G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联度高，脂质含量少，乙醇不易脱除染料。 G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度低，含大量脂质，乙醇易脱除染料。 等电点学说 G+菌等电点（pI2~3） G-菌等电点（pI4~5） 在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。 化学学说 G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色 G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色 器材和试剂： 1、菌种 金黄色色葡萄球菌 大肠杆菌 2、试剂 革兰染色液 初染液 结晶紫 媒染液 卢戈氏碘液 脱色液 95%乙醇 复染液 稀释石碳酸复红 3、其它 接种环 载玻片 染色盘 洗液瓶 酒精灯等 冲洗 染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果 方法与步骤 1、细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2、染色 初染（结晶紫） 媒染（卢戈氏碘液） 脱色 （95%乙醇） 复染（稀释石碳酸复红） 吸水纸 吸干 1min 1min 30s 30s 冲洗 冲洗 冲洗 一 一 半 半 G+菌 G-菌 结晶紫 卢戈氏碘液 95%乙醇 石碳酸复红 初染 媒染 脱色 复染 结果 图一 图二 无菌操作（接种环灭菌和取菌） 涂片的厚度要适中 染色的时间控制，一一半半 冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗 观察后将玻片放入玻片缸中 注意事项 意义 1.鉴别细菌 2.研究与致病性的 关系 3.指导临床用药 G+ G- G+ 致病 外毒素 G- 致病 内毒素 G+ 青霉素、头孢菌素等 G- 链霉素、庆大霉素等 细菌的特殊结构（示教）（二毛荚一胞） 从细胞质的基础颗粒长出，伸到细胞外面的细长呈波状弯曲的丝状物。 功能：鞭毛运动可鉴定、与致病性有关、具有抗原性（H抗原） 菌毛比鞭毛更更细、短、直、硬和多的丝状蛋白附属物，与运动无关，菌毛中空，可分为普通菌毛和性菌毛。 功能：普通菌毛附黏膜，性菌毛传递遗传物质。 荚膜 细菌细胞壁外包绕的一层粘液性物质，厚度≥0.2μm边界明显者称为荚膜，厚度＜0.2μm者称为微荚膜。 功能：荚膜护菌强致病---抗吞噬作用、抗有害物质损伤、抗干燥作用、黏附作用。 菌体内部物质缩水（60％）形成圆或卵圆形小体。 功能：芽胞形态辨细菌， 灭菌标准抗力强。 芽胞 油镜的使用方法 寻找视野：在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。 增大光照强度：将聚光器上升到最高位置，光圈开到最大。 转高倍镜头、滴加镜油、换油镜头：转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。 调试观察：观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。［如果不出现物象或者目标不理想要重新寻找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。］ 清洗镜头：油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上和标本上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯（或乙醚）擦去残余的香柏油，最后再用干擦镜纸擦干净。 物 镜 工作距离(mm) 低倍目镜 10× 5.40 高倍目镜 40× 0.39 油镜头 100× 0.11 实验报告 在封皮上标注班级和第4实验室 革兰染色 一、目的 二、原理（主要通透性） 三、材料 四、方法 五、结果（2+4幅图） 六、意义 七、注意事项 作业重点 1、