肽核酸药物的研究开发进展.pdfVIP

肽核酸药物研究开发进展 蒋建华严惠敏 (上海医药工业研究院，上海200040) nucleic 摘要：肽核酸(peptideacid，PNA)是一种以多肽或多肽样结构为骨架的新型 寡核苷酸拟似物。肽核酸与DNA或RNA的结合有很高的亲和力和特异性，并且具有很 好的温度、pH稳定性以及抗核酶和蛋白酶水解等特性。PNA已叠成为在分子生物学研 究中一种强有力的工具，并且有可能发展成为高效的基因治疗药物。 关键词：肽核酸；反义作用；反基因作用 nucleic 肽核酸(peptide acid，PNA)是一种由多肽或多肽样的骨架构成的新型寡 核昔酸拟似物，核酸中核糖磷酸酯的骨架一般由Ⅳ(2一氨基乙基)甘氨酸构成的假肽(聚酰 氨)替代，碱基则通过亚甲基碳酰基连接于主骨架，在骨架上还可以进行各种可能的修饰。 PNA中碱基与骨架间隔3个键，相邻碱基间隔6个键，空间大小与天然核酸相近， 加上结构上其它一些特性，使得PNA保持了对核酸的特异性识别能力。与ONs(寡核苷 酸)相比，PNA有多种特点，首先，整个分子不带电荷，这样就避免了与核酸杂交时的静 电排斥，亲和力更高；其次，PNA的结构单元是修饰氨基酸，因此可用多肽合成法大量 制备，还可用化学合成法在N端或C端连上配基或官能团；PNA的另一个优点是它不同 于核酸又区别于多肽的结构，使其在体内很稳定，不被核酸酶和蛋白酶降解，并且具有 良好的热稳定性“。l。 一、 NA的合成和理化性质 1．PNA的化学合成和纯化 PNA是非手『生的，因此合成不需要任何立体有择步骤，可采用Boc或Fmoc固相肽 合成方案，合成后可以对PNA进行修饰，lys、cys等氨基酸或含羧基化合物可在固相合 成时偶联到PNA骨架暴露的氨基N上，lys或cys残基上还可以再连接合适的官能团。 以8．氨基．3，6．二氧辛酸或6一氨基已酸为亚单位的柔性连接物，将两个PNA片断连接， HPLC纯化。 PNA／DNA 定的三螺旋复合物【4i。 图l pNA和DNA的化学结构 2．PNA的理化性质 PNA与DNA在空间结构上有很好的相似性，但化学性质差别很大。DNA经酸处理 后会发生脱嘌呤，而PNA对酸相当稳定，但PNA N～末端的自由氨基存在某些化学不 稳定因素，在一定条件下，可以缓慢发生N一乙酰化或环化反应。PNA不带电荷，因此 和嘌呤与嘧啶的比例有关。在c端或骨架中gly上偶联lys残基，引入正电荷，PNA／ 过测定80。C时280nm的吸收而确定口i，因为在806C时PNA核苷的碱基处于完全非堆积 状态，有序的非磷酸骨架对测定几无影响。 螺旋稳定的重要因素。 dS～ 图2 PNA与dsDNA以链取代方式形成三螺旋 49 PNA与ONs杂交复合物的稳定性受离子强度的影响不大，其热稳定性以及碱基错配 生一个错配，T。值下降8-20C(平均15 与一般ONs不同，寡聚PNA还可以形成反向和同向平行的双螺旋，但前者更加稳定。寡 聚PNA 合双螺旋Tm为56℃，同碱基序列的DNA双螺旋Tm值只有53。ct71。 表l PNA／0Ns与DNA／ONs稳定性比较 杂交复合物 T。 6一merPNAT，DNAA 3Z℃ 6．metDNAT，DNAA 10℃ A 73℃ 10．merP^，A丁／DⅣA 10．metDNAT，DNAA 2