肽核酸药物的研究开发进展.pdfVIP

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肽核酸药物研究开发进展 蒋建华严惠敏 (上海医药工业研究院,上海200040) nucleic 摘要:肽核酸(peptideacid,PNA)是一种以多肽或多肽样结构为骨架的新型 寡核苷酸拟似物。肽核酸与DNA或RNA的结合有很高的亲和力和特异性,并且具有很 好的温度、pH稳定性以及抗核酶和蛋白酶水解等特性。PNA已叠成为在分子生物学研 究中一种强有力的工具,并且有可能发展成为高效的基因治疗药物。 关键词:肽核酸;反义作用;反基因作用 nucleic 肽核酸(peptide acid,PNA)是一种由多肽或多肽样的骨架构成的新型寡 核昔酸拟似物,核酸中核糖磷酸酯的骨架一般由Ⅳ(2一氨基乙基)甘氨酸构成的假肽(聚酰 氨)替代,碱基则通过亚甲基碳酰基连接于主骨架,在骨架上还可以进行各种可能的修饰。 PNA中碱基与骨架间隔3个键,相邻碱基间隔6个键,空间大小与天然核酸相近, 加上结构上其它一些特性,使得PNA保持了对核酸的特异性识别能力。与ONs(寡核苷 酸)相比,PNA有多种特点,首先,整个分子不带电荷,这样就避免了与核酸杂交时的静 电排斥,亲和力更高;其次,PNA的结构单元是修饰氨基酸,因此可用多肽合成法大量 制备,还可用化学合成法在N端或C端连上配基或官能团;PNA的另一个优点是它不同 于核酸又区别于多肽的结构,使其在体内很稳定,不被核酸酶和蛋白酶降解,并且具有 良好的热稳定性“。l。 一、 NA的合成和理化性质 1.PNA的化学合成和纯化 PNA是非手『生的,因此合成不需要任何立体有择步骤,可采用Boc或Fmoc固相肽 合成方案,合成后可以对PNA进行修饰,lys、cys等氨基酸或含羧基化合物可在固相合 成时偶联到PNA骨架暴露的氨基N上,lys或cys残基上还可以再连接合适的官能团。 以8.氨基.3,6.二氧辛酸或6一氨基已酸为亚单位的柔性连接物,将两个PNA片断连接, HPLC纯化。 PNA/DNA 定的三螺旋复合物【4i。 图l pNA和DNA的化学结构 2.PNA的理化性质 PNA与DNA在空间结构上有很好的相似性,但化学性质差别很大。DNA经酸处理 后会发生脱嘌呤,而PNA对酸相当稳定,但PNA N~末端的自由氨基存在某些化学不 稳定因素,在一定条件下,可以缓慢发生N一乙酰化或环化反应。PNA不带电荷,因此 和嘌呤与嘧啶的比例有关。在c端或骨架中gly上偶联lys残基,引入正电荷,PNA/ 过测定80。C时280nm的吸收而确定口i,因为在806C时PNA核苷的碱基处于完全非堆积 状态,有序的非磷酸骨架对测定几无影响。 螺旋稳定的重要因素。 dS~ 图2 PNA与dsDNA以链取代方式形成三螺旋 49 PNA与ONs杂交复合物的稳定性受离子强度的影响不大,其热稳定性以及碱基错配 生一个错配,T。值下降8-20C(平均15 与一般ONs不同,寡聚PNA还可以形成反向和同向平行的双螺旋,但前者更加稳定。寡 聚PNA 合双螺旋Tm为56℃,同碱基序列的DNA双螺旋Tm值只有53。ct71。 表l PNA/0Ns与DNA/ONs稳定性比较 杂交复合物 T。 6一merPNAT,DNAA 3Z℃ 6.metDNAT,DNAA 10℃ A 73℃ 10.merP^,A丁/DⅣA 10.metDNAT,DNAA 2

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