阴虚动风证帕金森病LD大鼠TH、GDNF变化动态研究.pdfVIP

诊断：根据特殊人格表现，经过较长时问观察，或根据其以往行为的详细描述材料，诊断并尤闲难。 但应注意排除精神病与脑器质性疾病所致的人格改变。 阴虚动风证帕金森病LD大鼠TH、GDNF变化的动态研究 丁宏娟’何建成1周阿高2 (1上海中医药大学上海2012032上海交通大学医学院附属第九人民医院上海200011) 中医证本质的研究集中于探讨决定证发生发展的动态变化过程中的特殊物质群。进而揭示证候发展的 内在规律。帕金森病的主要病理改变为选择性中脑黑质多巴胺神经元缺失、纹状体DA含量显著减少，左 旋多巴(L—dopa，LD)疗效的取得实质上是以进一步损伤多巴胺神经元为代价的。已有的研究表明，酪氨 cel1 l 酸羟化酶(Tyrosinehydroxylase，TH)的活性和减少胶质源性神经营养因子(Glialine-derived factor，GDNF)的表达与LD有关。 neurotrophic 本研究借助前期研制的阴虚动风证帕金森病LD病证结合模型，观察阴虚动风证阴虚动风证LD模型的TH 及GDNF的动态变化，以期揭示该证的内在变化规律。 1 材料和方法 1．1材料 1．1．1动物及实验条件 物摄食饮水自由。 1．1．2药物 戊巴比妥钠：上海中西药业股份有限公司产品：左旋多巴干粉：美国Sigma公司产品；苄丝肼：美国 Sigma公司产品：庆大霉素：上海第一制药厂产品，0．39／支。 1．1．3试剂 美国Sigma公司产品：抗坏血酸：美国Sigma公司产品；TH、GDNF抗体：为SantaCruz公司产品；即用 公司产品。 1．1．4仪器 u 大鼠脑立体定位仪：TOW-3A型。广东汕头市教育医学仪器厂；微量进样器(51)：上海第三分析仪器 厂；旋涡混合器：)(1r一80A，上海医科大学仪器厂：分析天平：Sartorius 表：上海秒表厂，926266。 1．2模型制备方法 314 1．2．1PD模型制备 采用经典、公认的Ungerstedt等所创立的办法。术前按常规进行行为测试。确认尤异常旋转行为后． 用戊巴比妥钠(3％的戊巴比妥钠，50mg／kg)腹腔注射麻醉。然后将大鼠同定。j：脑立体定位仪上，头部去毛， 苯扎溴铵(商品名：新洁尔灭)常规消毒。允菌条件下，沿正中线切开大鼠颅顶皮肤，剥离骨膜，暴露前囟。 以前囟为准，根据包新民等蔫大鼠脑立体定位图谱，确定右侧黑质：坐标：①前囟后5．2mm，正中线右侧 钻开颅骨，用5u lI Il 溶二f生理盐水5ml中)注入右侧黑质部(以1．Omm／min速度缓慢进针)，每孔31，注射速度为11／min， 切口皮肤，肌肉注射庆大霉素7天，待动物清醒后放同饲养笼中饲养。 lOd后，以腹腔注射APO 转圈数平均7次／min者为合格的PD模型。 1．2．2阴虚动风证帕金森病LD大鼠模型制备 上午9时和下午5时)，连续2周。2周后诱发动物，具有典型AIM表现，且APO诱导大鼠对侧旋转圈数增加者， 为成功阴虚动风证帕金森病LD模型(简称阴虚动风证LD模型)。 假手术组只注射含0．02％维生素c的等景生理盐水，其余条件与造模手术相同：正常对照组只固定大 鼠，不进行任何处理，亦均为lOd。正常对照组、假手术组、PD模型对照组给予腹腔注射等量的含0．05％ 的乙醇和0．1％的抗坏血酸的注射用水，每日两次，连续2周。 1．3分组及给药 本研究共分4组，正常对照组、假手术组、PD模型对照组、阴虚动风证阴虚动风证LD模型组，每组18 PD模型对照组、正常对照组、假手术组给予腹腔注射等量的含0．05％的乙醇和0．1％的抗坏血酸的注射用 水。每组在2周、4周、6周三个不同时间点，各取6只大鼠，进行TH及GDNF的免疫组化检测。 1．4TH及GDNF免疫组化检测方法． (1)石蜡切片常规脱蜡和水化；(2)PBS(PH7．4)冲洗3次，每次5分钟： 终．It：反应，苏木素复染，自来水冲洗返蓝，盐酸酒精分化；(11)梯度洒精脱水，-