改良银染法在病理诊断与应用.pdfVIP

201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 95．改良银染法在病理诊断中的应用 张丹 北京世济合力生物科技有限公司 银染法是利用生物组织成分对银离子还原性质的不同，借助显影液中对苯二酚对银离子 的还原显影作用，使不同组织部位银离子密度不同，从而显示从浅黄色到黑色不同的色彩， 也显示出组织形态及其中寄生微生物的形态。银染法作为传统的特殊染色方法仍然是显示病 原体、组织及细胞内特殊结构的简便而可靠的方法之一，我们通过使用北京世济合力生物科 技有限公司生产的银染试剂盒(改良银染法)对病理组织进行染色，现就其染色方法及其在 病理学中的应用进行研究： l实验样品与方法：银染试剂盒(改良银染法)，购于北京世济合力生物科技有限公司。 1．1．实验前准备：取15ml溶剂加入浸银液粉缸，将脱蜡到水的石蜡切片(或固定后的细 胞涂片、冷冻切片)用蒸馏水涮洗1次后放入缸中；再分别取5ml、10ml溶剂加入显影液 粉1、2瓶中。将以上浸银液及显影液共同置于60℃温箱中助溶、浸银(最少30rain)，完 全溶解后取出备用。 1．2．实验步骤： 1．2．1将浸银液缸内的液体全部倒掉，蒸馏水涮洗2次； 1．2．2将显影液l中液体倒入显影液2中，快速摇匀后加入到浸银液缸中，显影1-5min左 右(以组织呈现咖啡色为宜)； 1．2．3倒掉浸银液缸中的液体，自来水涮洗2次； 1．2．4脱水透明封片。 2银染法的应用 银染法原为螺旋体的染色方法，经改进用于幽门螺杆菌检测。后发现此方法还可以用于 其他微生物如猫抓病巴通菌、球菌、放线菌、鼻硬结杆菌、真菌以及尘埃颗粒、矽结节、神 经纤维及髓鞘、生物被膜、黑色素颗粒等检测。现针对此方法用以检测。 2．1检测微生物 2．1．1检测螺旋体 螺旋体是一群细长、柔韧、弯曲呈螺旋状的原核细胞微生物， 其特性介于细菌与原虫 之间。由于螺旋体折光性低与透明液体相似， 故用一般染料不易着色，须用银染色在高倍 显微镜下才能查见， 显色为棕黑色。螺旋体染色的机制被认为是螺旋体表面含有黏多糖和 蛋白，．在一定温度下能吸附硝酸银中的银离子，再经过显色剂作用使银离子被还原为金属 银， 而使梅毒螺旋体染色为棕黑色Kllo目前银染法仍然是显示螺旋体的最佳组织学特殊染 色方法，同时对梅毒螺旋体、文森螺旋体、钩端螺旋体等可有较好的显示。 2．1．2检测幽门螺杆菌 肠溃疡和80％左右的胃溃疡，都是由HP感染所导致的，并且HP感染与胃癌有密切 关系，同时与胃癌的恶性程度相关。HP银染原理是HP具有嗜银性：由于HP鞭毛的顶 端有时可见一球状物，实为鞘的延伸物。每一鞭毛根部均可见一个圆球状根基伸入菌 体顶端细胞壁内侧。在其内侧尚有一电子密度降低区域，此区域与银结合强，在一定 条件下，HP可以从银液中吸附银离子，后经孵育液中的显色剂处理，HP内已吸咐的银离子 被还原为黑色的金属银而显色。银染法能直观地对Hp感染进行诊断，敏感性和特异性、准 确性均较高‘H1，并可以半定量检测HP，半定量如下：(+)轻度：胃粘膜表面及小凹内偶 见待检细菌：(++)中度：胃粘膜表面及小凹内可见散在的待检细菌，未聚集成簇；(卅) 18l 2011年全围痛理技术新进展研讨舍论文正螭 重度：胃粘膜表面及小凹内可见大量待检细菌，聚集成簇或片(图1、2幽门螺杆茁，胃粘 膜内可见散在簇状或片状的Hp改良银染法)。 2 1 3检测巴通菌 猫抓病(CSD)是世界性广泛分布的动物原性传染病，主要由猫传播．其病原为一种革 兰染色阴性、银染色阳性的巴通菌(Bh)，但长期以来用各种细菌染色方法在病变淋巴结中 均不见巴通菌．细菌培养亦阴性(该菌不易在常用培养基中生长)。Wear在l例曾被猫抓伤 的女孩的淋巴结用银染色首次发现嗜银杆菌。其染色原理是Bh苗呈现多形性，一端粗大如 棒状，常呈链状排列，有分枝及分隔。可构成嚼状，银颗粒可附着于其膜外，使杆菌外形变 粗大易于观察。在受累{I}巴结内，特别在坏死区．用银染法可找见灶性分布的巴通体茁，这 对诊断非常重要”1。 2．1 4检iI放线菌 放线菌是革兰阳性丝状杆菌，是引起放线菌病的病原菌，放线菌病是由以色列放线菌、 牛放线菌或赖氏放线苗感染引起的慢性化脓性内芽肿痛变，可发生于身体任何部位，主要侵 犯颌颈部和胸腹部。徐