犬脂肪干细胞在犬皮肤创伤修复中作用.pdfVIP

2013年第十五次全国芥犬学术研讨会暨g-e次全国小动物医学学术研讨会论文集 犬脂肪干细胞在犬皮肤创伤修复中的作用 尹玉鑫1施振声1曾申明2 (1．中国农业大学动物医学院，北京海淀，100193； 2．中国农业大学动物科技学院，北京海淀，100193) 摘要：脂肪干细胞由于其获取方便，具有多向分化能力且体外增殖能力强，近年来 在创伤愈合和组织修复过程中的作用日益受到研究者的重视。本研究为犬同种异体脂肪 干细胞在犬皮肤全层创伤愈合中的作用，以便其在小动物临床治疗应用中提供一定的试 验支持。 本研究对五只犬进行直径三厘米的皮肤全层切除从而建立创伤模型，创伤局部注射 经Dil荧光染料染色的异体脂肪干细胞，与未注射脂肪干细胞的对照组进行对照，从伤口 愈合状况，伤口愈合率及愈合时间，肉芽组织的组织学切片观察，新生皮肤组织冰冻切 片荧光显微镜观察等方面进行评价，结果表明犬异体脂肪干细胞创伤局部注射后，犬没 有表现出不良反应，注射部位无异常；五只犬中三只试验组愈合速度快于对照组，上皮 化时间较早。一只无差别，另一只试验组慢于对照组；肉芽组织切片观察，试验组新生 血管密度高于对照组，且胶原纤维更加丰富；试验组新生皮肤组织中发现红色荧光散在 存在于真皮上部，对照组未见红色荧光存在。 研究结果表明，犬异体脂肪干细胞可减少炎症反应，促进犬皮肤创伤愈合速度，提 高肉芽组织中新生血管密度，增加胶原纤维的分泌量，并且可存在于新生的皮肤组织中。 关键词：脂肪干细胞，创伤，愈合，组织切片 Stem 引言：脂肪组织来源的干细胞(Adipose—Derived 等【11通过脂肪抽吸法获得的一种纤维样的细胞成分，经免疫荧光和流式细胞仪器检测， 发现其主要来源于中胚层与问叶，并证明其具有类似干细胞样的多向分化能力怛1，使这 种原本不太受欢迎的脂肪物质有可能成为干细胞库的重要来源，并可作为多种组织工程 的种子细胞，使其具有非常重要的研究和应用价值。 创伤愈合是一个复杂的过程，它需要经过细胞迁徙和增殖、细胞外基质沉积、血管 再生和组织重构等一系列复杂的生物和分子水平改变共同作用完成。 目前相关研究报道发现，ADSCs对创伤愈合与组织修复的主要方面表现如下： (1)ADSCs对成纤维细胞(FibroblastFB)的作用： 344 犬脂肪干细胞在犬皮肤创伤修复中的作用 可促进成纤维细胞的增值、迁徙功能。 (2)ADSCs对新生组织血供的影响 相关研究证明，在特殊培养基的诱导下，ADSCs可分化成血管内皮细胞瞪1；同时， ADSCs分泌的生长因子H HGF(干细胞生长因子)等，该类因子都可促进新生血管的形成。Kim等进行的干细胞 处注入脂肪干细胞后，7天后通过组织切片及B超扫描新生组织发现，其新生的血管数量 及血流量与对照组都有明显的差别。并发现标记的干细胞存在于新生的血管内皮中，并 表达CD31，表明其在活体内分化为内皮细胞。 (3)ADSCs对新生皮肤表皮组织的影响 研究证实，hADSC细胞在全反式维甲酸的诱导下，能向上皮细胞分化07|，并有细胞 生的上皮组织中，并表达角化细胞特有的K5，K14，证明其可分化为角化细胞。 1材料与方法 1．1试验动物 供体犬选自中国农业大学动物医院手术室进行生理性绝育手术的成年健康母犬 试验犬为中国农业大学动物医院研究用犬，经过临床检查和特殊检查确定健康 1．2主要试剂与器材 I型胶原酶、0．25胰蛋白酶、DMEM培养基、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显 微镜、组织切片机、冰冻切片机、荧光显微镜 2试验方法 2．1脂肪干细胞的获取及标记 供体试验犬麻醉，于腹腔镰状韧带切取脂肪组织，超净台中胶原蛋白酶消化、过滤、 培养，细胞传至第三代时，使用Dil荧光染料对脂肪干细胞进行标记 2．2试验犬皮肤创伤模型的建立 选取五只健康的试验犬，分别于犬的肩胛部、臀部两侧，分别做直径三厘米的皮肤 创口，左侧作为试验组，右侧作为对照组 2．3脂肪干细胞的注射 左侧试验组创口平均分四点，皮下注射含标记脂肪干细胞的DMEM液，右侧对照组 同样方法注射无脂肪干细胞的DMEM液，创口按常规创