3种壳聚糖对团头鲂体外头肾吞噬细胞呼吸爆发功能的影响.pdfVIP

第 33卷 第 3期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vo1．33 No．3 2014年 5月 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity May2014．72～ 77 3种壳聚糖对团头鲂体外头肾吞噬 细胞呼吸爆发功能的影响 郗明君 刘立春 张 涓 汤孝成 刘小玲 林 蠡 华中农业大学水产学院／淡水水产健康养殖湖北省协同创新 中心／农业部淡水生物繁育重点实验室，武汉 430070 摘要 采用51 Percoll非连续密度梯度离心法分离团头鲂头肾吞噬细胞，在光镜和电镜下观察所分离细 胞的显微、超微结构及吞噬作用；以二氢罗丹明(DHR123)为荧光探针，流式细胞仪检测细胞在佛波豆蔻酸乙酯 (PMA)刺激下产生的呼吸爆发活动；光镜下观察壳聚糖对吞噬细胞吞噬功能的影响。结果表明：分离得到的细 胞具有吞噬细胞 (巨噬细胞与中性粒细胞)的形态学及功能特征；3种壳聚糖组 (100~／g／mL)均能提高吞噬细胞 的呼吸爆发功能，在发荧光细胞比例及细胞发荧光强度上均极显著高于对照组。其中水溶性壳聚糖组的发荧光 细胞比例显著高于其他试验组 ，而在细胞发荧光强度上，普通壳聚糖作用相对较高；同时壳寡糖能增强吞噬细胞 的吞噬活性 。 关键词 团头鲂 ；吞噬细胞；呼吸爆发；壳寡糖 ；水溶性壳聚糖 ；普通壳聚糖；吞噬作用 中图分类号 S942．5 文献标识码 A 文章编号 1000—2421(2014)03—0072—06 近年来，随着水产养殖业的发展，养殖规模不断 部位，吞噬病原体，并且产生一系列活性氧杀死病原 扩大、养殖密度不断增加，养殖过程中疾病的发生越 生物。同时其他免疫参数如溶酶体活性、补体活性 来越频繁，经常发生病毒性、细菌性、寄生虫感染等 都得到加强。吞噬活性和呼吸爆发功能被认为是评 疾病，而抗生素的使用所带来的负面影响也 日益突 价活化吞噬细胞功能的重要指标 。 出，如病原菌耐药性的增强，水产动物细胞免疫和体 目前壳聚糖对鱼类吞噬细胞呼吸爆发功能的体 液免疫功能的下降，同时药物的残留也直接威胁到 内试验已有报道_4]，而壳聚糖对体外分离吞噬细胞 人类的健康和安全，因此，从免疫学角度对水产动物 的影响还未见报道。本试验采取体外分离团头鲂头 进行病害防治逐渐成为研究热点。免疫刺激剂是指 肾吞噬细胞，检测 3种壳聚糖对吞噬细胞呼吸爆发 能够激活机体免疫机能，增强机体对传染性疾病抵 功能的影响，旨在为研究壳聚糖与吞噬细胞结合的 抗力的一种物质。其主要作用机制是作用于细胞表 作用机制奠定基础。 面的受体，使细胞产生细胞因子从而将病原清除，以 1 材料与方法 达到增强机体免疫功能的目的_l1]。免疫刺激剂的应 用对控制水产养殖中的鱼类疾病具有重要意义[2]。 1．1 试验材料 壳聚糖作为一种免疫刺激剂，是 自然界唯一存在的 试验鱼：团头鲂(体质量 180~270g，体长 2O～ 碱性多糖 ，其在调节哺乳动物体外分离免疫细胞的 29cm)购 自武汉市先建村渔场 ，于华 中农业大学水 功能已有报道_3J。 产养殖基地进行驯养，驯养期间水温为 25～28℃， 团头鲂 (Megalobramaamblycephala)是一种 水源为充分曝气的自来水，溶氧保持在 6mg／L，每 重要的养殖鱼类 ，头肾是其重要的免疫器官，头肾吞 日投喂2次(09：O0，16：0o)。投喂饲料 由水产基地 噬细胞是其非特异性防御系统中的关键部分。当病 提供。 原生物侵入机体时，吞噬细胞被激活并迁移至炎症 试剂：L一15培养基购 自Gibco公司。Percol1分 收稿 日期：2013—03—12 基金项 目：中国水产科学研究院淡水生态与健康养殖重点开放实验室开放课题(2010FEA03012)和国家重点基础研究发展计划 (“973”)项 目(2OO9CB1187O6) 郗明君，硕士研究生．研究方向：水产动物疾病防治．E-mail：xim ing