水通道蛋白1在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织的表达和其意义.pdfVIP

…心甏器NA甓NT怒ONG f⑧翟鬻舞麟焉割瞧峻流会 本研究结果显示，ANP大鼠在制模后3h开始，其胰腺EB含量即显著高于对照组俨 o．01)，表明在ANP大鼠模型早期，胰腺组织的毛细血管通透性显著升高，这与病理检 测显示胰腺显著水肿、大量腹水形成相符。大柴胡汤组胰腺EB含量显著低于ANP组， 提示大柴胡汤可以有效减轻该模型大鼠胰腺组织的毛细血管渗漏。 如前所述，ANP大鼠模型中胰腺组织毛细血管通透性升高，应用大柴胡汤后，各时 间点胰腺组织毛细血管通透性明显低于ANP组。免疫组化检测胰腺组织AQPl阳性表达， 显示大柴胡汤组大鼠各时间点AQPl表达显著弱于ANP组。WesternBlot检测组织AQPl 蛋白表达显示在3h胰腺组织AQPl蛋白表达显著高于ANP组。这些结果提示，大柴胡汤 可以反向上调AQPl的表达，提高其转运毛细血管内外水的能力，促进组织水肿的吸收， 改善病情。类似结果尚未见报道，值得进一步研究。 综上应用大柴胡汤预处理可以有效减轻ANP大鼠胰腺组织的病理改变，降低组织毛 细血管通透性有关，这可能与大柴胡汤上调AQPl表达有关。 参考文献：略 水通道蛋白l在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织的表达及其意义 奉典旭陈亚峰李秋营孔雷施浩然蔡杰饶亚敏盛霞陈腾韩峰 上海中医药大学附属普陀医院普外科200062 acute 重症急性胰腺炎(severe 死亡率高，发病机制至今尚未阐明11-21。其基本的病理改变包括胰腺组织水肿、出血、坏 死，导致大量渗出，并可累及全身多个脏器f3l，因此SAP成为胰腺外科研究的主要方向之 一【4】。研究其发生机制将有助于寻找尽早控制胰腺炎病情发展的方法。近年研究发现，机 皮，具有选择性介导细胞膜内外水的转运的功能，从而对毛细血管内外水的转运起重要作 用【5{】．、胸腹膜的上皮细胞和微血管内皮细胞，对毛细血管内外水的转运起主导作用。研 究发现AQPl与急性胰腺炎相关肺损伤中起重要作用。本研究旨在探讨AQPl在急性坏死 性胰腺炎(acute necrotizing 透性的关系。 材料与方法 大鼠胆胰管肝门水平用无损伤血管夹暂时夹闭，经十二指肠侧壁逆行胆胰管穿刺，按 1。5ml／k 针，轻压十二指肠穿刺孔，无渗漏后缝合腹壁各层，制成ANP模型。对照组轻轻翻动十 二指肠及胰腺后关腹。标本收集：各组大鼠造模后于3、6、12、18h各时间点分批处死， 2009国际肝胆胰外科南通论坛 暨第二十二届呈国肝胆胰外斛学术经验交流会 蚴鲫她科叼R删 每个时间点每组处死6只。各组大鼠处死前lh，经阴茎静脉按lml／kg体重剂量注入2％ 伊文思兰(EvansBlue，EB)染料。记录腹水量。抽取腹主动脉血：于3000r／m5min离心， 取上清，用于淀粉酶、AQPl测定。胰腺组织，分为两份，l份常规中性福尔马林固定、 石蜡包埋，用于病理和免疫组化检测。病理评估HE染色，光镜下阅片。另l份液氮冻存， 用于毛细血管通透性、WesternBlot等检测。 COBAS) 2．血清淀粉酶、AQPl测定：采用酶法在全自动生化分析仪(INTEG】认400， 按说明书操作。 3．毛细血管通透性测定：采用EB染料法检测胰腺组织毛细血管通透性。EB进入血管后， 与血液中的白蛋白结合，随着血管渗透性增加，EB随着白蛋白外渗至组织间隙。因此通 过检测组织中EB含量可反映毛细血管通透性的变化。方法：取组织300mg，加入lml甲 根据所测组织的A值和标准曲线计算组织中EB含量。 4．免疫组化检测胰腺组织AQPl蛋白表达：按常规免疫组化方法，采用即用型免疫组化 Elivision plus广谱试剂盒(福州迈新)。AQPl表达主要定位于组织毛细血管内皮细胞膜， 阳性细胞表现为细胞膜上弥漫性棕黄色或棕褐色颗粒。利用高清晰病理图文报告分析系 统，将免疫组化染色结果转化为数据进行定量分析。每张切片挑选3个视野，净灰度值= 背景灰度一阳性灰度。 5．Western Blot法检测胰腺组织中AQPl蛋白表达：将组织标本匀浆裂解后制成蛋白匀浆， 溶液中室温孵育lh以封闭膜上的非特异结合，TBS／T洗膜后，按说