AFLP标记及其在植物中的应用.pdfVIP

维普资讯 江西林业科技 2006年第5期 AFLP标记及其在植物中的应用 江 梅，李小平，温 强，叶金山，江香梅 (江西省林业科学院省植物生物技术重点实验室，江西南 吕 330032) 摘 要：时AFLP基本原理、技术流程及特点做 了简要介绍：从遗传多样性和亲缘关系分析、遗传连锁 图谱构建、种 质资源鉴定、基 因定位与克隆、基 因表达与调控、分子标记辅助选择育种等方面概述 了AFLP标记在植物中的应用 ，并对 其应用前景进行 了展望。 关键词 ：AFLP；分子标记：植物 ；应用 分类号：Q789：$7 文献标识码：A 文章编号：1006-2505(2006)05-004]一40 AFLP(AmplifiedFragmentLen舢 Polymorphism，扩增 1．3 AFLP技术的特点 片断长度多态性1是 1992年由荷兰科学家Zabeau和Vos发 AFLP结合了RFLP和 RAPD的优点，主要表现在：① 展起来的一种检测DNA多态性检测方法It]，1993年获得欧 AFLP标记理论上可以无限多，可覆盖整个基因组 ，不需要 洲专利局专利。AFLP技术是在RFLP和RAPD基础上发展 预知 I)NA序列信息，呈典型的孟德尔方式遗传；②AFLP 起来的，具有 RAPD和RFLP技术的双重优点，对基因组的 技术能高效地检测出DNA的多态性 ，几乎每对 AFLP引 多态性检测不需要预知该基因组 的序列特征 ．易于标准 物都可以扩增出具有多态性的片段，一般一次检测可获得 化 ，所检 出的多态位点同RAPD一样可覆盖整个基因组：同 5；0—100个AFLP扩增带 ： DNA用量少 ，且对模板浓度变 时具有与 RFLP标记同样的稳定性和可靠性 ]。因此，AFLP 化不敏感；④可靠性好，分辨率和重复性高；⑤引物通用性 被认为是迄今为止最有效 的分子标记_4]，被广泛应用于农作 强_6．7]。 物、蔬菜、林木、果树等植物的遗传多样性和亲缘关系分析、 2 AFLP在植物分子生物学研究中的应用 遗传连锁图谱构建、种质资源鉴定、基因定位与克隆、基因 1 遗传多样性和亲缘关系研 究 表达与调控、标记辅助选择育种等方面研究。 开展遗传多样性研究有利于正确制定植物资源收集 1 AFLP技术原理、流程及特点 保存策略，确定植物遗传多样性中心和亲缘关系等。AFLP 1．1 AFLP技术的基本原理 已广泛应用于植物遗传多样性检测和分析f8_。王燕等 采 AFLP技术是先将基因组 DNA用两种限制性内切酶 用AFLP标记分析 了元宝山冷杉种群的遗传多样性 ，4对 酶切成大小不等的酶切片断，并与含有粘性末端的人工接 引物共扩增出261条谱带，多态位点百分率为 50．96％，认 头相连 ，形成不同酶切位点的限制性酶切片段 ，然后用 与 为元宝山冷杉种群的遗传多样性水平低 ，种群内个体间的 接头和位点相匹配的引物进行预扩增 ，预扩增产物作为进 丰f{似性系数很大 ，无明显亚种群 间的遗传分化 ，从而为冷 一 步 PCR扩增的模板 ，再选用特异引物进行选择性扩增 ， 杉保护策略和保存措施的制订提供 了理论依据 。张磊等 l【0] 扩增后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳将特异的限制性片 用 l2对引物对 28个巾国红花不 同栽培种群进行 AFLP分 段分离C5]。由于不同来源 的DNA的酶切片段存在差异 ，因 析，共扩增出845条带，多态位点达 73％，各种群 间的遗传 而便产生了扩增产物的多态性。