中药灌肠Ⅰ号对小鼠结肠炎治疗作用和免疫学机制研究.pdfVIP

61 中药灌肠I号对小鼠结肠炎治疗作用及免疫学机制研究 刘萍1，安晓霞2， 李燕2，董波2，孙淑华2，莘旭妮2，毛建平2，崔玉芳2，(I解放军总医院药品保障中 心中药房。北京，100853；2军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京，100850) colitis，UC)和克罗恩病(crohn’S 重视，由于对于uc的病因和发病机制目前仍不十分清楚【1】。因此，治疗上也有很大的难度，我们已 通过组织免疫学验证法成功建立了2，4-二硝基氯苯(DNCB)结合乙酸(从)法诱导的小鼠结肠炎动 物模型，本实验用我们的专利组合中药方灌肠I号【2】与柳氮磺胺吡啶实施uc模型小鼠灌肠治疗观察， 旨在进行疗效比较和干预机制的研究。 1试剂与材料 司，硫化钠、2，4一二硝基氯苯(DNCB)和乙酸(从)购自北京化学试剂公司，(均为分析纯)；柳 中药房生产(批号：070205)。 1．2仪器流式细胞仪(型号：FACSCalibur；美国BectonDickinson公司生产) 1．3实验动物KM小鼠46只，体重28。359，雌雄各半，由军事医学科学院实验动物中心提供(实验 动物合格证号：SCXK-(军)2002一001)。以上动物均饲养在本院二级动物房。 2实验方法 2w诱发溃疡性结肠炎模型[引。 2．2实验治疗及给药途径建模1w后，I组和Ⅱ组均以等体积蒸馏水灌肠：Ⅲ组以蒸馏水配制的SASP 每次2ml，1次／d／只，6只给药1周，其余给药2周。 2．3临床症状和病理学观察治疗期间，观察小鼠进食、排便、精神和体重等临床症状。各组均于给 药后1和2周处死小鼠，留取结肠组织入10％甲醛液固定，石蜡包埋，常规HE染色，观察结肠组织 病理学改变。 2．4外周血和肠系膜淋巴结细胞悬液制备活杀前从小鼠眼眶取血0．-lml，肝素抗凝。0．1ml用作流 式细胞仪分析…，其余用淋巴细胞分离液分离后制备淋巴细胞离心涂片．处死小鼠后迅速摘取肠系膜 淋巴结，剥离干净脂肪组织后置于预冷的无血清RPMI1640液中，在冰上用200目不锈钢筛网上研磨， 制成细胞悬液，调整细胞浓度为108／m1，0．1ml用作流式细胞仪分析，其余制作细胞离心涂片。 2．5T细胞亚群表面标志的流式细胞仪分析取肝素抗凝的外周血和制备的肠系膜淋巴结细胞悬液各 100 II Il 1，PE-CD294．5“1室温避光孵育30min后，外周血样品中加入红细胞裂解液(1：9稀释)2ml／管， PBS重悬，上机检测。2．6肠道组织学评分将肠道组织常规切片，作HE染色．并计分，评分标准【5】为 0分：无明显炎症；1分：少量淋巴细胞浸润(10鬈高倍视野)，并无结构的改变；2分：中量淋巴细 胞浸润(10鬈一25％高倍视野)，隐窝变长，肠壁增厚，但未透过黏膜层，无溃疡形成；3分：明显淋巴细胞 浸润(25％一50％高倍视野)，血管密度增加，肠壁增厚，透过黏膜层；4分：大量淋巴细胞浸润(50％高 第十一届总直药学学术研讨会论文囊 。。 秒 倍视野)，血管密度增加．隐窝变长扑扭曲，肠壁全层增厚，可见溃疡形成。 2．7统计学处理采用sPss软件包，进行方差分析和f检验。 3实验结果 3．1病理学观察太体观察可见，11组小鼠出现明显脓血样便(见图1A)，结肠病变主要集中在远端 结肠，其结肠长度较I组明显缩短(PO05)，(见固1B)。体标本可见结肠粘连，狭窄，近段结肠扩 张．粘膜充血、糜烂、溃疡和脓肿形成(见图lC)。 图1．比磷罐小鼠的病理表现 AUC模型n十鼠血＆，B镕％长度(±)鞋t常fT)目i缩*，C镕％#腱雎肿#贵冉彤成。 3 1 2显微镜观察11组可见肠绒毛结构破坏，杯状细胞减少甚至消失，淋细胞浸润明显，隐窝脓肿 形成(见图2A)。IE组及中药藩肠治疗l’2w后结肠损伤程度明显减轻，结肠长度和I组比较未见明 显差别。炎性细胞浸润明显减少，绒毛排列整齐，杯状细胞明显再生(见图2B)，肠腺结构接近于 正常组织(见图2C)。 阿2．UC婪型小鼠